Survivin蛋白在小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞食管癌中表達(dá)的對(duì)比研究.pdf

1、研究背景 凋亡異常是當(dāng)前腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。目前已知的凋亡調(diào)節(jié)因子有Bcl-2和IAP(inhibitor ofapoptosis protein，IAP)家族。Survivin是IAP家族中最小的成員，是己知的功能最強(qiáng)的抗凋亡因子，在大多數(shù)惡性腫瘤中高表達(dá)而正常組織中不表達(dá)，是一種很有前景的腫瘤特異性標(biāo)志物。 小細(xì)胞癌(small cell carcinoma)是一種惡性度及死亡率高的少見(jiàn)惡性腫瘤。小細(xì)胞癌大多數(shù)發(fā)生在

2、肺內(nèi)，發(fā)生在肺外的大約只占5﹪，以原發(fā)性食管小細(xì)胞癌(primary esophageal small cell carcinoma，PESC)最多見(jiàn)。有人認(rèn)為，不同組織器官發(fā)生的小細(xì)胞癌有共同的臨床病理特點(diǎn)及高度侵襲性的生物學(xué)特性。也有人認(rèn)為，肺外小細(xì)胞癌的生物學(xué)行為及預(yù)后都不同于小細(xì)胞肺癌(small cell lung carcinoma，SCLC)。目前關(guān)于PESC的組織起源仍有爭(zhēng)議，主要有兩種學(xué)說(shuō)，即起源于與SCLC相同的神經(jīng)

3、內(nèi)分泌細(xì)胞(amine precursor uptake anddecarboxylation，APUD)細(xì)胞，或與食管鱗腺癌同源的食管黏膜全能干細(xì)胞。 由于PESC發(fā)病率很低，人們對(duì)其認(rèn)識(shí)有限，目前對(duì)此病的治療方案比較混亂，治療策略的探討也有很大的難度，臨床上預(yù)后很差。 本研究組在2003年用免疫組化的方法檢測(cè)了凋亡抑制蛋白Survivin在PESC中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：Survivin蛋白在PESC中表達(dá)下調(diào)，只有

4、25．6﹪，而細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵蛋白酶Caspase-3的活性相對(duì)較高，蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為61．5﹪，且兩者的分布有差異性。 相對(duì)于非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung carcinoma，NSCLC)生物學(xué)行為及分子機(jī)制越來(lái)越深入的研究，SCLC和IPESC癌變機(jī)制的研究進(jìn)展，尤其是PESC的研究進(jìn)展似乎止步不前。SCLC和PESC的發(fā)生機(jī)制目前都還不明確，但現(xiàn)在對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)基因的研究已經(jīng)表明細(xì)胞凋亡異常是許

5、多腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制之一。因此我們選擇從以下兩個(gè)層面來(lái)探討小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞食管癌凋亡抑制的發(fā)生機(jī)制及其異同。 第一部分： 目的比較PESC和SCLC兩種不同組織器官發(fā)生的小細(xì)胞癌在凋亡調(diào)控基因表達(dá)上的異同，探討兩者發(fā)病機(jī)制的異同，以加深對(duì)PESC及SCLC這兩種腫瘤的發(fā)生發(fā)展及生物學(xué)特性的了解，尤其是PESC這種罕見(jiàn)腫瘤的了解，有助于尋找和開(kāi)辟PESCI~床治療的新途徑。方法選取4l例SCLC，采用免疫組化SP法(St

6、reptavidin-peroxidase)檢測(cè)凋亡調(diào)控蛋白Survivin、Caspase-3、Bcl-2、MTP53和增殖蛋白Ki-67的表達(dá)，結(jié)果與本研究組前期在PESC上檢測(cè)到的相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行比較。 結(jié)果 1.SCLC的Survivin、Caspase-3、Bcl-2、MTP53和Ki-67五種蛋白的表達(dá)率與PESC無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中Survivin在SCLC和PESC的表達(dá)率分別為29.3﹪和25.6﹪；Bel.

7、2在SCLC和PESC的表達(dá)率分別為63.4﹪和48.7﹪；MTP53在SCLC和PESC的表達(dá)率分別為56.1﹪和53.8﹪：Caspase.3在SCLC和PESC的表達(dá)率分別為51.2﹪3161.5﹪：Ki-67在SCLC和PESC的表達(dá)率分別為65.9﹪和46.2﹪。 2.SCLC中Survivinl陰性組CaspaSe-3的表達(dá)率(62.1﹪，18/29),顯著高于Survivinl陽(yáng)性組(25﹪，3/12)，兩者表達(dá)呈

8、負(fù)相關(guān)(r=0.337，P<0.05)；PESC中Survivin陰性組Caspase-3的表達(dá)率(72.4﹪，21/29),顯著高于陽(yáng)性組(30.0﹪，3/10)，兩者表達(dá)也呈負(fù)相關(guān)(r=0.381，P<0.05)。SCLC及PESC中均未發(fā)現(xiàn)Bd-2與Caspase-3的表達(dá)有相關(guān)性(P均>0.05)。 3.SCLCqb，Bel一2陽(yáng)性組中MTP53的表達(dá)率(69.2﹪，18/26)顯著高于陰性組的表達(dá)率(33.3﹪，5/1

9、5)，兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.348，P<0.05)；PESC中，Bcl-2陽(yáng)性組q~MTP53的表達(dá)率(73.7﹪，14/19)高于陰性組的表達(dá)率(35.0﹪，7/20)，兩者表達(dá)也呈正相關(guān)(r=0.388，P<0.05)。SCLC及PESC中均未發(fā)現(xiàn)Survivin與MTP53的表達(dá)有相關(guān)性(P均>0.05)。 4.SCLC和PESC中，Survivin與Bcl．2表達(dá)之間均無(wú)相關(guān)性(P均>0.05)。 結(jié)論 SCLC和H

10、PESC的抗凋亡通路中存在諸多的相同之處：凋亡抑制蛋白Survivin、Bcl-2、MTP53均參與了兩種小細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展；Survivin、Bcl-2、MTP53三個(gè)蛋白在兩種腫瘤中發(fā)揮的作用相似。 第二部分： 目的比較SCLC與NSCLC組織器官發(fā)生相同、病理類型不同的兩種腫瘤的凋亡調(diào)控基因表達(dá)的異同，有助于加深對(duì)SCLC這種罕見(jiàn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展及生物學(xué)特性的了解，有助于間接地加深對(duì)PESC發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)。

11、方法選取30例NSCLC及20例癌旁正常組織，采用免疫組化SP法檢測(cè)以上五個(gè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，與SCLC對(duì)應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比，并探討它們與肺癌生物學(xué)特征間的關(guān)系及這些因素間的相關(guān)性。 結(jié)果 1.SCLC的發(fā)病年齡<60歲占63.4﹪，高于NSCLC的36.7﹪(P<0.05)。SCLC Ⅲ-Ⅳ期的比例明顯高于NSCLC(P<0.05)。SCLC與NSCLC在性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否方面無(wú)顯著差異。 2.SCLC和NSC

12、LC腫瘤組織中Survivin、Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于正常對(duì)照組(P值~均<0.01)；SCLC中Survivin陽(yáng)性表達(dá)率(29.3﹪)顯著低于NSCLC(70﹪)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。SCLC中Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率(63.4﹪)顯著高于NSCLC(30﹪)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。而Caspase-3蛋白在SCLC與NSCLC中表達(dá)率無(wú)顯著性差異(P>0.05)． 3．SCLC和NSCLCH腫瘤組織

13、中KI顯著高于正常組織(P值均<0.01)。SCLC的KI(11.12±0.37﹪)顯著高于NSCLC(4.55±0.28﹪)，兩者有顯著性差異(P<0.01)。 4.SCLC中，Survivin與Caspase-3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.337，P<0.05)；NSCLC中，Survivin陽(yáng)性組HCaspase-3的表達(dá)率(88.9﹪，8/9)顯著高于陽(yáng)性組(19.0﹪，4/21)，Survivin與Caspase-3的表

14、達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.653，P<0.01)。SCLC中，Bcl-2與MTP53的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0-348，P<0.05)；NSCLC中，Bcl-2陽(yáng)性組中MTP53的表達(dá)率高于陰性組的表達(dá)率，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)意義。SCLC和NSCLC中，Survivin與Bcl-2之間均無(wú)顯著相關(guān)性(P均>0.05)。 5．SCLC中，Caspase-3陽(yáng)性組KI(18．16±0．29﹪)高于陰性組(6．62+0．40﹪)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

15、<0.05)；NSCLC增殖指數(shù)KI與各個(gè)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)、年齡、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移及臨床分期均無(wú)顯著相關(guān)性P＜0.05)． 6．SCLC中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Survivin陽(yáng)性率(53．3﹪)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(15．4﹪)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 SCLC和NSCLC既存在相同之處也存在差異：凋亡抑制蛋白Survivin、Bcl-2、MTP53均參與了兩種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。其中Bcl-2可能是SCLC凋