食管癌組織中CTTN表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、1.研究背景和目的：
　　食管癌是世界上最常見的六大惡性腫瘤之一，中國是世界上食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國家。由于缺乏特異性強(qiáng)、敏感度高和經(jīng)濟(jì)簡便的早期診斷和高危人群篩查指標(biāo)和方法，臨床上初次就診的患者中，90％以上均為中、晚期患者，預(yù)后極差，5年生存率僅為10％左右。腫瘤的早中晚分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等被認(rèn)為是影響食管癌預(yù)后的主要因素。腫瘤細(xì)胞的浸潤侵襲和惡性轉(zhuǎn)移則是導(dǎo)致食管癌復(fù)發(fā)和死亡的主要原因。但是臨床上經(jīng)常發(fā)現(xiàn)腫瘤組織

2、分化程度或TNM分期與預(yù)后不一致的現(xiàn)象，即組織分化程度較高的患者預(yù)后并不一定比分化差的患者好，屬于同一TNM分期的患者可能具有明顯不同的預(yù)后，提示單純從形態(tài)學(xué)的改變判斷患者預(yù)后，存在一定的主觀和客觀局限性。很顯然，進(jìn)一步闡明這些患者的分子變化特征，尋到與預(yù)后的相關(guān)因子，提前判斷預(yù)后，及時(shí)指導(dǎo)是食管癌術(shù)后個(gè)體化綜合治療對提高患者的生存率有重大意義。
　　CTTN蛋白(cortical actin binding protein)簡稱

3、cortactin，位于染色體11q13區(qū)上的CTTN基因所編碼的蛋白，最初作為致癌的酪氨酸蛋白激酶v-src的底物而被鑒定發(fā)現(xiàn)，與微絲激動蛋白和致癌性酪氨酸激酶v-Src結(jié)合，而影響細(xì)胞的運(yùn)動性、侵襲性、突觸發(fā)生、吞噬以及腫瘤轉(zhuǎn)移灶形成。但是至今CTTN的表達(dá)與食管癌預(yù)后的關(guān)系仍未見報(bào)道，本課題通過免疫組化方法分析CTTN在361例食管癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)合臨床參數(shù)，探討CTTN與食管癌預(yù)后的關(guān)系，以期建立食管癌患者預(yù)后的分子指標(biāo)，

4、進(jìn)而指導(dǎo)個(gè)體化治療。
　　2.材料與方法：
　　2.1、研究對象
　　食管癌組織:361例食管癌手術(shù)切除標(biāo)本組織絕大部分來自于河南、河北、山西等食管癌高發(fā)地區(qū)醫(yī)院收治的腫瘤患者，且經(jīng)病理診斷證實(shí)為食管鱗癌。其中男性239例（平均年齡為58±8歲，年齡范圍為38-78歲），女性122例（平均年齡為59±7歲，年齡范圍為41-74歲）。
　　2.2、組織處理
　　組織標(biāo)本經(jīng)85％酒精固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋，4

5、μm連續(xù)切片3張，一張無水酒精固定作HE染色進(jìn)行組織病理診斷，核實(shí)組織病理學(xué)診斷，一張用于免疫組織化學(xué)染色，一張備用。
　　2.3、免疫組織化學(xué)
　　免疫組織化學(xué)采用pv9000試劑盒檢測食管癌組織中CTTN蛋白的表達(dá)。一抗為兔抗人CTTN蛋白多克隆抗體，濃度1∶400。免疫蛋白陽性著色主要定位于正常上皮主要為胞漿染色，腫瘤染色則分布于胞漿或胞膜，為棕黃色。定性:根據(jù)免疫陽性細(xì)胞染色程度設(shè)定:組織未見染色的為陰性（-）;全部

6、細(xì)胞輕度染色或染色程度雖為中強(qiáng)度但細(xì)胞比例少于25％的為陽性Ⅰ級（弱陽性）(+);全部細(xì)胞中度染色或有25-50％的細(xì)胞染色程度深者為陽性Ⅱ級(++);50％以上的細(xì)胞染色程度深者為陽性Ⅲ級（強(qiáng)陽性）(+++)。
　　2.4、隨訪
　　對所有研究病例進(jìn)行術(shù)后跟蹤隨訪，隨訪截止時(shí)間為2010年12月。全部得到完整隨訪資料（包括:性別、年齡、病理診斷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、浸潤程度、分化程度、TNM分期、腫瘤部位、手術(shù)時(shí)間、隨訪

7、時(shí)間、健康狀況等）。其中死亡146例，死因均為腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。
　　2.5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)（包括:性別、年齡、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、腫瘤部位、腫瘤分型、臨床分期等），生存分析采用Kaplan-Meier乘積限法分析。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)取α=0.05。
　　3.結(jié)果：
　　3.1、性別分組CTTN的表達(dá)

8、　　男性239例(66％，239/361):陰性8％(20/239)、弱陽性36％(85/239)、陽性30％(72/239)、強(qiáng)陽性26％(62/239);
　　女性122例(34％，122/361):陰性10％(12/122)、弱陽性27％(33/122)、陽性34％(41/122)、強(qiáng)陽性29％(36/122)。
　　CTTN表達(dá)與性別無相關(guān)性(P＞0.05，P=0.327)。
　　3.2、不同年齡組CTTN蛋白

9、表達(dá)
　?。?5歲組14例(4％，14/361):陰性21％(3/14)、弱陽性36％(5/14)、陽性43％(6/14)、強(qiáng)陽性0％(0/14);
　　45-55歲組106例(29％，106/361):陰性9％(10/106)、弱陽性26％(28/106)、陽性38％(40/106)、強(qiáng)陽性26％(28/106);
　　55-65歲組161例(45％，161/361):陰性11％(12/161)、弱陽性35％(52/

10、161)、陽性31％(47/161)、強(qiáng)陽性23％(50/161);
　　≥65歲組79例(22％，79/361):陰性9％(7/79)、弱陽性41％(32/79)、陽性25％(20/79)、強(qiáng)陽性25％(20/79)。
　　CTTN表達(dá)與年齡無相關(guān)性(P＞0.05，P=0.064)。
　　3.3、家族史陽性/陰性患者CTTN蛋白表達(dá)
　　361例患者中共有256例有家族史的記錄，其中:
　　家族史陽性10

11、4例(41％，104/256):陰性9％(9/104)、弱陽性32％(33/104)、陽性27％(28/104)、強(qiáng)陽性33％(34/104);
　　家族史陰性152例(59％,152/256):陰性12％(18/256)、弱陽性26％(39/256)、陽性32％(48/256)、強(qiáng)陽性31％(47/256)。
　　CTTN表達(dá)與家族史陰、陽性無相關(guān)性(P＞0.05,P=0.914)。
　　3.4、腫瘤類型分組CTTN

12、的表達(dá)
　　潰瘍型80例(22％,80/361):陰性14％(11/80)、弱陽性24％(19/80)、陽性30％(24/80)、強(qiáng)陽性32％(26/80);
　　髓質(zhì)型187例(52％,187/361):陰性8％(15/187)、弱陽性37％(69/187)、陽性33％(62/187)、強(qiáng)陽性22％(41/187);
　　縮窄型31例(9％,31/361):陰性7％(2/31)、弱陽性36％(12/31)、陽性26％

13、(8/31)、強(qiáng)陽性29％(9/31);
　　蕈傘型63例(17％,63/361):陰性6％(4/63)、弱陽性29％(18/63)、陽性30％(19/63)、強(qiáng)陽性35％(22/63)。
　　CTTN表達(dá)與腫瘤類型無相關(guān)性(P＞0.05,P=0.305)
　　3.5、腫瘤部位分組CTTN的表達(dá)
　　食管上段45例(12％,45/361):陰性13％(6/45)、弱陽性27％(12/45)、陽性38％(17/45

14、)、強(qiáng)陽性22％(10/45);
　　食管中段275例(76％,275/361):陰性7％(20/275)、弱陽性36％(100/275)、陽性29％(80/275)、強(qiáng)陽性27％(75/275);
　　食管下段41例(12％,41/361):陰性15％(6/41)、弱陽性15％(6/41)、陽性39％(16/41)、強(qiáng)陽性32％(13/41)。
　　CTTN表達(dá)與腫瘤部位無相關(guān)性(P＞0.05,P=0.601)。

15、r>　　3.6、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分組CTTN的表達(dá)
　　淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性134例(37％,134/361):陰性10％(14/134)、弱陽性36％(48/134)、陽性29％(39/134)、強(qiáng)陽性25％(33/134);
　　淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性227例(63％,227/361):陰性8％(18/227)、弱陽性31％(70/227)、陽性32％(74/227)、強(qiáng)陽性29％(65/227)。
　　CTTN表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰、陽

16、性無相關(guān)性(P＞0.05,P=0.202)。
　　3.7、CTTN在浸潤深度的腫瘤組織的表達(dá)
　　侵及黏膜下層45例(12％，45/361):陰性4％(2/45)、弱陽性20％(9/45)、陽性27％(12/45)、強(qiáng)陽性49％(22/45);
　　侵及肌層71例(20％，71/361):陰性6％(4/71)、弱陽性32％(23/71)、陽性35％(25/71)、強(qiáng)陽性27％(19/71);
　　侵及纖維膜245

17、例(68％，245/361):陰性11％(26/245)、弱陽性35％(86/245)、陽性31％(76/245)、強(qiáng)陽性23％(57/245)。
　　CTTN表達(dá)與腫瘤浸潤程度明顯負(fù)相關(guān)(P＜0.05，P=0.000)。
　　3.8、不同分化程度腫瘤組織CTTN蛋白的表達(dá)
　　高分化36例(10％，36/361):陰性0％(0/36)、弱陽性31％(11/36)、陽性31％(11/36)、強(qiáng)陽性38％(14/36);

18、
　　中分化232例(65％，232/361):陰性8％(18/232)、弱陽性34％(79/232)、陽性31％(72/232)、強(qiáng)陽性27％(63/232);
　　低分化93例(25％，93/361):陰性15％(14/93)、弱陽性30％(28/93)、陽性32％(30/93)、強(qiáng)陽性27％(21/93)。
　　CTTN表達(dá)與腫瘤分化程度無相關(guān)性(P＞0.05，P=0.069)。
　　3.9、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移分組C

19、TTN的表達(dá)
　　遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移陽性8例(2％，8/361):陰性0％(0/8)、弱陽性13％(1/8)、陽性37％(3/8)、強(qiáng)陽性50％(4/8);
　　遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移陰性353例(98％，353/361):陰性9％(32/353)、弱陽性33％(117/353)、陽性31％(110/353)、強(qiáng)陽性27％(94/353)。
　　CTTN表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移陰、陽性無相關(guān)性(P＞0.05，P=0.091)。
　　3.10、CT

20、TN早、中、晚期腫瘤組織的表達(dá)
　　早期組36例(10％，36/361):陰性6％(2/36)、弱陽性22％(8/36)、陽性22％(8/36)、強(qiáng)陽性50％(18/36);
　　中期組214例(59％，214/361):陰性8％(17/214)、弱陽性34％(72/214)、陽性33％(71/214)、強(qiáng)陽性25％(54/214);
　　晚期組111例(31％，111/361):陰性12％(13/111)、弱陽性34

21、％(38/111)、陽性31％(34/111)、強(qiáng)陽性23％(26/111)。
　　CTTN表達(dá)與腫瘤早期、中期、晚期分期明顯負(fù)相關(guān)(P＜0.05，P=0.028)。
　　3.11、CTTN蛋白表達(dá)與患者生存期關(guān)系
　　361例食管癌組織中CTTN蛋白表達(dá)陰性32(9％)、弱陽性118(33％)、陽性113(31％)、強(qiáng)陽性98(27％)，經(jīng)過Kaplan-Meier生存分析CTTN的表達(dá)強(qiáng)度與生存期無相關(guān)性(P＞0.