組蛋白H2AX的磷酸化與細(xì)胞周期相關(guān)性的分析.pdf

1、目的：對組蛋白H2AX的磷酸化(g-H2AX)與細(xì)胞周期的相關(guān)性作一分析并探討，為了進(jìn)一步研究組蛋白H2AX的磷酸化(g-H2AX)在機(jī)體中的作用積累資料。方法：MOLT-4細(xì)胞、加PHA培養(yǎng)48h的PBLs和不加PHA的PBLs在經(jīng)紫外線照射處理后，分別于不同的時(shí)間點(diǎn)收取細(xì)胞，使用具有熒光標(biāo)記的g-H2AX抗體，特異性的標(biāo)記位于細(xì)胞核內(nèi)的DNA雙鏈斷裂(DNA double-strand breaks, DSBs)位點(diǎn)處的g-H2AX

2、焦點(diǎn)，然后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行定量檢測并分析DNA的損傷程度，并用流式細(xì)胞儀以亞G1峰法(sub-G1peak)對細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測，使用免疫印跡法(western blot)檢測g-H2AX的表達(dá)。結(jié)果：MOLT-4細(xì)胞、加PHA培養(yǎng)48h的PBLs和不加PHA的PBLs在經(jīng)紫外線照射處理后，隨著時(shí)間的推移，在DNA直方圖上均出現(xiàn)了明顯的亞G1峰，并且凋亡細(xì)胞逐漸增多；均出現(xiàn)了g-H2AX熒光強(qiáng)度的增加，隨著時(shí)間的推移，該增加有先