基于γH2AX的免疫熒光分析技術(shù)定量檢測CT照射后人外周血單個核細(xì)胞的DNA損傷.pdf

1、第一部分：γH2AX分析定量檢測CT照射后人外周血單個核細(xì)胞DNA損傷的體外實(shí)驗(yàn)研究 目的： 以γH2AX的熒光顯像和定量檢測為依據(jù)，通過體外實(shí)驗(yàn)研究，初步了解CT輻射劑量與人外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)γH2AX焦點(diǎn)數(shù)量之間的相關(guān)性。 材料和方法： 67名志愿者納入研究，簽署知情同意書后，分別經(jīng)肘靜脈采集外周血標(biāo)本，分裝至抗凝管中，在不同的劑量下進(jìn)行體外照射，照射后5分鐘對血標(biāo)本進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)室處理：

2、分離單個核細(xì)胞，固定，破膜，封閉，染色，測定γH2AX的表達(dá)。熒光顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)γH2AX焦點(diǎn)，分析其與CT輻射劑量之間的關(guān)系。CT輻射劑量參數(shù)使用DLP值(劑量長度乘積)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法采用秩和檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、線性相關(guān)和回歸分析。 結(jié)果： 體外CT照射后5分鐘人外周血PBMCsγH2AX焦點(diǎn)數(shù)量較基底水平(空白對照)顯著增加(劑量閾值>199.64 mGy·cm)，通過熒光顯微鏡檢測到的γH2AX焦點(diǎn)數(shù)量與DLP值呈線

3、性正相關(guān)，直線回歸方程模型為：Y=0.1917X+0.1248，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000 R2=0.906)。 結(jié)論： 體外經(jīng)一定劑量CT照射后，人外周血PBMCs DNA損傷誘發(fā)H2AX活化產(chǎn)生γH2AX，其數(shù)量與CT輻射劑量有較高的相關(guān)性。 第二部分：體內(nèi)外經(jīng)CT照射后外周血單個核細(xì)胞yH2AX焦點(diǎn)數(shù)量的初步臨床研究 目的： 通過對臨床患者CT照射后外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)γH2

4、AX焦點(diǎn)數(shù)量進(jìn)行體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究，對比分析γH2AX焦點(diǎn)數(shù)量的差異及可能產(chǎn)生機(jī)制，引進(jìn)一種新的生物劑量標(biāo)記物--γH2AX，進(jìn)一步探討γH2AX分析的作為生物劑量計(jì)應(yīng)用前景。 材料和方法： 選取符合標(biāo)準(zhǔn)的15名臨床CT檢查患者為研究對象。簽署知情同意書后，CT檢查前經(jīng)肘靜脈采集血樣4ml/人，按2ml/管分裝入2個抗凝管中，標(biāo)記為①空白對照組，②體外受照組。第①管血樣置于37℃孵育箱中以保持細(xì)胞活性，各處理。第②管血樣固定

5、于病人體表的掃描范圍中心，使其始終處于照射野內(nèi)，掃描結(jié)束后取出第②管血樣，置入37℃孵育箱中保持細(xì)胞活性，各處理；CT檢查完成后5分鐘，經(jīng)患者肘靜脈再行采集血樣2ml/人，編號為③體內(nèi)受照組，立即同步對3組血樣進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)室處理：分離單個核細(xì)胞，固定，破膜，封閉，染色，測定γH2AX的表達(dá)。熒光顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)γH2AX焦點(diǎn)，進(jìn)行對比分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用t檢驗(yàn)、線性相關(guān)和回歸分析。 結(jié)果： 體內(nèi)、外受照組CT照射后5分