T淋巴細胞γ-H2AX微流控芯片免疫染色技術(shù)研究.pdf

1、微流控芯片(Microfluidic chip)是一種微型化、集成化的技術(shù)平臺。它能把整個生物或化學(xué)過程整合到一個只有幾平方厘米的芯片上，并且易于自動化操控。應(yīng)用微流控技術(shù)進行實時現(xiàn)場生物標(biāo)志物監(jiān)測是作為健康評估的一個有前景的技術(shù)。γ-H2AX熒光標(biāo)記技術(shù)能夠檢測T淋巴細胞的輻射損傷，可以為實施現(xiàn)場評估輻射損傷提供重要的監(jiān)測靶目標(biāo)。本研究為實現(xiàn)在芯片上自動化操控T淋巴細胞進行γ-H2AX免疫熒光標(biāo)記的過程，研究了免疫磁珠結(jié)合淋巴細胞在芯

2、片上的驅(qū)動作用、γ-H2AX免疫熒光標(biāo)記芯片的設(shè)計和優(yōu)化、利用人CD4細胞進行UVC紫外線輻射產(chǎn)生DNA的γ-H2AX熒光標(biāo)記及其在芯片上實現(xiàn)特異性標(biāo)記反應(yīng)。
　　研究表明，利用永久磁鐵帶動2.8μm磁珠既滿足磁鐵帶動CD4淋巴細胞在芯片上的拖動，又不影響輻照產(chǎn)生的γ-H2AX相對熒光強度與輻照劑量的線性關(guān)系。本研究優(yōu)化了在芯片上實現(xiàn)CD4淋巴細胞γ-H2AX免疫的反應(yīng)池和間隔池的數(shù)量分別為6個和5個，確立了各個反應(yīng)池的反應(yīng)試劑量

3、，確立了細胞與磁珠結(jié)合比為1/10，細胞上樣量為2×105。在芯片上通過永久磁鐵拖動結(jié)合了磁珠的淋巴細胞實現(xiàn)了對CD4淋巴細胞γ-H2AX免疫特異性熒光標(biāo)記。通過對不同劑量(0、16、32、64J/m2)的UVC紫外輻照后的淋巴細胞的γ-H2AX相對熒光強度分析，獲得的相關(guān)系數(shù)為0.9517，證實利用該技術(shù)可以監(jiān)測到輻射損傷與輻照劑量的線性關(guān)系。
　　本研究可以為微流控芯片自動免疫熒光染色裝置以及便攜式細胞生物學(xué)實驗儀器的開發(fā)提供