釀酒酵母中AFR1在G1-S和G2-M階段的功能.pdf

1、在酵母細(xì)胞中信息素信號(hào)通路和細(xì)胞壁完整性通路是兩條重要的MAP激酶信號(hào)通路，它們之間具有很重要的交互作用。Afrlp同時(shí)受到兩條信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄因子Ste12和Rlm1的轉(zhuǎn)錄激活。它對(duì)兩條通路中的信號(hào)調(diào)節(jié)具有極其重要的作用。對(duì)AfRlp功能及作用機(jī)制的探索將有助于解決相關(guān)領(lǐng)域重要的科學(xué)問(wèn)題。 本論文主要考察了Afrlp在細(xì)胞周期G1/S、G2/M中的功能。通過(guò)同源重組將LUE2插入缺失了野生型AFR1基因。將afrI△菌株經(jīng)信息素α

2、因子同步后重新釋放到新鮮培養(yǎng)基中，觀察發(fā)現(xiàn)，其細(xì)胞出芽率明顯低于野生型細(xì)胞，這說(shuō)明：當(dāng)afrI△菌株從a因子誘導(dǎo)的G1期停滯中恢復(fù)時(shí)，其生長(zhǎng)速度慢于對(duì)照菌株。因此，Afrlp有促進(jìn)細(xì)胞從G1期停滯中恢復(fù)生長(zhǎng)的作用。但是，afrI△菌株從營(yíng)養(yǎng)缺乏的GO周期停滯中重新恢復(fù)生長(zhǎng)時(shí)，與野生型菌株相比，細(xì)胞出芽率沒(méi)有明顯差別，說(shuō)明Afrlp對(duì)穩(wěn)定期G0細(xì)胞的恢復(fù)生長(zhǎng)并無(wú)影響。溫度敏感突變株406(cdc28 afrI△::LEU2)在限制性溫度下

3、生長(zhǎng)停滯后恢復(fù)生長(zhǎng)，其細(xì)胞出芽率明顯低于菌株cdc28-4(cdc28)，因此認(rèn)為，Afrlp有促進(jìn)細(xì)胞從限制溫度引起的停滯中恢復(fù)生長(zhǎng)的作用。 在釀酒酵母中通過(guò)半乳糖誘導(dǎo)過(guò)量表達(dá)Afrlp 6小時(shí)后，細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的極化生長(zhǎng)現(xiàn)象，形成了多核的長(zhǎng)芽細(xì)胞，該細(xì)胞形態(tài)與隔膜蛋白Cdc12p溫度敏感突變株在限制溫度下形成的形態(tài)相類似，因此推測(cè)，過(guò)量表達(dá)的Afrlp可能影響了Cdc12p的正常功能，使其不能正確將Hsllp定位至芽頸并磷酸