長鏈非編碼RNA CACNA1g-AS1在瘢痕疙瘩中的功能探究.pdf

1、背景:瘢痕疙瘩一種良性的皮膚增生性疾病，但由于其侵襲周邊正常組織，會造成患者的功能障礙和外形缺陷，加上其反復復發(fā)的特性，常常伴有的瘙癢和疼痛癥狀，嚴重影響了患者的生活質量。瘢痕疙瘩發(fā)病原因未明，治療上缺乏公認的有效手段，是目前整形美容外科治療的一大棘手問題。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類長度大于200bp的非編碼RNA，從轉錄水平、轉錄后水平、表觀遺傳學等層面參與了諸多細胞進程如細胞周期和增殖、分化、凋亡的調(diào)控，部分lncRNA

2、被發(fā)現(xiàn)參與惡性腫瘤、皮膚疾病的發(fā)生發(fā)展中。目前，世界范圍內(nèi)尚未有對瘢痕疙瘩lncRNA的研究報道。在我們課題組的前期研究中，發(fā)現(xiàn)了lncRNACACNA1G-AS1(CAS1)在瘢痕疙瘩組織中存在特異性高表達，提示其可能參與到瘢痕疙瘩形成機制中。
　　目的:在國內(nèi)外范圍內(nèi)，首次探究CAS1在瘢痕疙瘩成纖維細胞中的生物學功能，如對細胞增殖、細胞遷移、分泌細胞生長因子TGF-β、分泌Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白、調(diào)控鈣通道蛋白Cav3.1表達等

3、的影響，以期發(fā)現(xiàn)治療瘢痕疙瘩的潛在靶點。
　　方法:取北京協(xié)和醫(yī)院整形美容外科就診的3名瘢痕疙瘩患者（簽署知情同意書）的部分瘢痕疙瘩組織進行成纖維細胞原代及傳代培養(yǎng)，利用siRNA技術干擾CAS1的表達，檢測轉染效率及干擾效率達到要求后，再應用細胞增殖檢測和細胞周期流式檢測技術探究對細胞增殖的影響，利用劃痕實驗探究對細胞遷移的影響，利用qRT-PCR技術探究對細胞因子TGF-β、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白分泌的影響，以及對鈣通道蛋白Cav

4、3.1 mRNA（即CACNA1G）表達的影響，與轉染陰性對照序列的對照組進行對比。
　　結果:(1)干擾CAS1表達的實驗組與對照組相比，CAS1的干擾效率達到50％以上，可以進行下一步實驗。(2)在qRT-PCR檢測中，實驗組的CACNA1G和Ⅰ型膠原蛋白mRNA表達明顯降低，分別為對照組的47％和59％;(3)劃痕實驗中，實驗組的劃痕愈合時間比對照組明顯延長;(4)實驗組qRT-PCR中TGF-β和Ⅲ型膠原蛋白mRNA的表達