釀酒酵母Afr1p蛋白的功能研究.pdf

1、AFR1基因于1993年被Konopka發(fā)現(xiàn)。接下來的研究工作顯示，過量表達(dá)Afr1p可促進(jìn)a型細(xì)胞對α因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞周期停滯的適應(yīng)；Afr1p對于細(xì)胞融合過程中融合突起的形成至關(guān)重要，afr1△菌株不能形成尖的融合突起；Afr1p定位于細(xì)胞融合突起的基部以及出芽細(xì)胞的頸部；在有絲分裂期的細(xì)胞中過量表達(dá)AFR1，細(xì)胞出現(xiàn)過度極化生長現(xiàn)象，細(xì)胞形態(tài)與隔膜蛋白(septins)溫度敏感突變株在限制溫度下的形態(tài)相似，都形成多核的長芽細(xì)胞。

2、 本論文通過在細(xì)胞中同時過量表達(dá)AFR1與CDC12，研究Afr1p與Cdc12p間的相互關(guān)系。實驗發(fā)現(xiàn)采用多拷貝載體過量表達(dá)Cdc12p可以抑制在半乳糖誘導(dǎo)條件下攜帶GAL-AFR1質(zhì)粒的細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生缺陷；由于Afr1p與Cdc12p共定位于出芽細(xì)胞的頸部，因此半乳糖誘導(dǎo)Afr1p過量表達(dá)可能破壞了Cdc12p的正常定位，細(xì)胞形態(tài)檢驗點(diǎn)被異常激活，細(xì)胞不能進(jìn)入M期，因而細(xì)胞呈現(xiàn)過度極化生長，芽的形態(tài)變長。與這一假設(shè)相符，除了

3、被過量表達(dá)Cdc12p抑制外，Afr1p過量表達(dá)引起的異常細(xì)胞形態(tài)還可被缺失SWE1基因抑制，也可被缺失MIH1基因加強(qiáng)。Cdc12p在細(xì)胞內(nèi)的正確定位依賴于Afr1p，無論在出芽細(xì)胞還是在受信息素誘導(dǎo)而形成融合突起的細(xì)胞中，AFR1基因的缺失都會導(dǎo)致Cdc12p的定位異常。 缺失AFR1基因使被α因子阻滯在G1期的細(xì)胞表現(xiàn)出恢復(fù)生長延遲的表型，說明Afr1p有促進(jìn)被α因子阻滯在G1期的細(xì)胞恢復(fù)生長的作用，這與過量表達(dá)Afr1p

4、可以使細(xì)胞產(chǎn)生對α因子的抗性相一致；AFR1基因缺失對G0期細(xì)胞重新進(jìn)入有絲分裂細(xì)胞周期沒有影響。 afr1△菌株的融合效率低于野生型細(xì)胞，過量表達(dá)Mpk1p使其融合效率更低：但AFR1缺失可以提高極化小體(polarism)組分缺失菌株的融合效率。極化小體組分缺失導(dǎo)致Mpk1p活性增強(qiáng)，細(xì)胞融合效率下降。在極化小體組分缺失菌株中缺失AFR1可以降低Mpk1p的活性，從而使細(xì)胞的融合效率增加。 實驗結(jié)果表明，SPA2過量