氯乙烯對大鼠肝細胞周期及G1-S關卡相關基因mRNA表達的影響.pdf

1、目的:
　　 觀察氯乙烯(vinyl chloride monomer, VCM)染毒大鼠肝臟細胞周期不同時相的分布及細胞周期G1/S關卡相關基因mRNA表達的變化，從周期調控的角度，探討VCM可能的致癌機制。
　　 方法:
　　 選用健康清潔級SD大鼠64只，按體重隨機分為4組:陰性對照組，5、25、125mg/kg VCM染毒組。隔日腹腔注射染毒，連續(xù)12周。分別在染毒6周、12周處死動物。用流式細胞儀(FC

2、M)分析肝臟細胞周期分布和細胞凋亡率的情況;肝臟組織HE染色觀察組織形態(tài)變化;實時熒光定量PCR方法測定細胞周期G1/S關卡的正性調控相關基因細胞周期蛋白A2(cyclinA2/CCNA2)、細胞周期蛋白D1(cyclinD1/CCND1)、細胞周期蛋白E1(cyclinE1/CCNE1)、細胞周期蛋白依賴性激酶2(CDK2)、細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和負性調控相關基因p53(TP53)、p21(CDKN1A)、p16(CD

3、KN2A) mRNA的表達以及miR-122a的表達水平。
　　 結果:
　　 細胞周期分布結果顯示，染毒6周，5、25mg/kg VCM染毒組大鼠肝臟細胞G0/G1期分布百分比分別為(69.73±10.94)和(74.32±9.29)，均高于對照組(56.13±10.65)，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);25mg/kgVCM染毒組S期分布百分比(1.80±2.11)低于對照組(12.82±5.85)，差異有統(tǒng)計學

4、意義(P＜0.05）。染毒12周，各染毒組大鼠肝臟細胞G0/G1期分布百分比與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);125 mg/kg VCM染毒組肝細胞S期分布百分比(14.91±4.43)高于對照組(6.68±2.64)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　 細胞凋亡率顯示，6周和12周大鼠肝細胞凋亡率隨著染毒劑量的增加而升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 肝臟組織HE染色結果顯示，對照組和5

5、mg/kg VCM染毒組未見肝細胞變性或壞死;25mg/kg VCM染毒組觀察到肝細胞變性，包括脂肪樣變、空泡變性等;125mg/kg VCM染毒組肝細胞變性加重，觀察到脂肪樣變、空泡變性、氣球樣變等，匯管區(qū)變大，纖維化及細胞核腫脹等病理改變。
　　 染毒6周，VCM染毒組肝臟細胞CCND1、CDK4和CDK2基因mRNA的表達均低于對照組，且125mg/kg VCM染毒組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。肝臟細胞

6、TP53、CDKN1A、CDKN2A、CCNA2和CCNE1基因mRNA的表達沒有明顯的改變，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　 染毒12周，肝臟細胞CDKN1A基因mRNA表達隨著染毒劑量的增加有升高的趨勢，125mg/kg VCM染毒組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。肝臟細胞TP53、CDKN2A、CCNA2、CCND1、CCNE1、CDK2和CDK4基因mRNA的表達沒有明顯的改變，差異無統(tǒng)計學意義(

7、P＞0.05）。
　　 染毒12周，外周血淋巴細胞G1/S關卡相關基因TP53、CDKN1A、CDKN2A、CCNA2、CCND1、CCNE1、CDK2和CDK4基因mRNA的表達均沒有明顯的改變，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 染毒12周，肝臟細胞miR-122a的表達水平隨著染毒劑量的增加有降低的趨勢，但各染毒組與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　 結論:
　　 1.肝臟

8、是VCM毒作用的靶器官之一。肝臟細胞出現(xiàn)變性，匯管區(qū)變大，纖維化及細胞核腫脹等病理改變。
　　 2.VCM誘導大鼠肝臟細胞周期阻滯，早期阻滯于G0/G1期，晚期阻滯于S期。
　　 3.VCM可能影響大鼠肝臟細胞G1/S關卡功能。
　　 4.在本實驗條件下，VCM對大鼠肝臟細胞凋亡率無影響。
　　 5.VCM對G1期的阻滯主要是通過下調CCND1、CDK4以及CDK2基因的表達。
　　 6.VCM對