乙肝病毒X蛋白的穩(wěn)定表達對肝細胞凋亡和細胞周期的影響及機制.pdf

1、目的：研究乙肝病毒(HBV)X基因及其產物HBx蛋白對肝細胞HL-7702的凋亡和細胞周期的影響，并探討相關機制。 方法：用分子克隆方法構建HBV X基因重組質粒pcDNA3-X，將其與空質粒pcDNA3轉入HL-7702細胞中，經過G418的篩選構建2株新的細胞株，分別命名為HL-7702-HBx和HL-7702-con。RT-PCR和Western-blot分析證實HL-7702-HBx細胞穩(wěn)定表達HBVX基因。運用DNA

2、ladder，流式細胞分析和電鏡等方法檢測這兩株細胞的凋亡和細胞周期情況。并通過人類凋亡和細胞周期基因芯片分析這兩株細胞凋亡和細胞周期相關基因的差異表達，最后經Real-timePCR和Western-blot進一步驗證。 結果：重組質粒pcDNA3-X轉染后經G418篩選，RT-PCR和Western-blot分析結果顯示HL-7702-HBx細胞能夠穩(wěn)定表達HBV X基因。DNA ladder，流式細胞分析和電鏡觀察顯示與對

3、照組相比，HL-7702-HBx細胞出現(xiàn)凋亡，并有更多的細胞處于S期。cDNA芯片分析顯示一些DNA修復基因(XRCC1，DDB1，erc)和細胞周期點調控相關基因(Cdc47，RADl7,etc)參與了這一過程。cDNA芯片和Real-time PCR結果顯示HBx可以上調XRCCl，Cdc47，RAD17 mRNA的表達，而蛋白印跡實驗卻顯示HBx下調這三個基因的蛋白表達。 結論通過抑制DNA修復和細胞周期點調控，HBx蛋白