乙肝病毒X蛋白對凋亡蛋白PDCD5表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]
　　 建立以及鑒定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞L02/HBX，在獲得陽性克隆細(xì)胞后，通過RT-PCR,western-blot對PDCD5的mRNA與蛋白的檢測，研究乙肝病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein，HBx）對凋亡蛋白PDCD5的表達(dá)。
　　 [方 法]
　　 （1）復(fù)蘇及培養(yǎng)L02細(xì)胞，應(yīng)用G418篩選L02細(xì)胞，得到細(xì)胞最低致死濃度。
　　 （2）建立轉(zhuǎn)染HBx基因的L0

2、2 (L02/HBX)細(xì)胞系，并通過RT-PCR,western-blot進(jìn)行鑒定，確定HBx基因轉(zhuǎn)染成功。
　　 （3）通過Real-time PCR和Western Blot檢測轉(zhuǎn)染HBx基因后PDCD5mRNA和蛋白表達(dá);
　　 [結(jié) 果]
　　 （1）復(fù)蘇并培養(yǎng)L02細(xì)胞，經(jīng)G418篩選得知，當(dāng)G418濃度在500-700ug/ml時，L02細(xì)胞全部死亡；當(dāng)G418濃度在500ug/ml以下時，L02細(xì)胞

3、均可存活。所以經(jīng)過試驗(yàn)得出L02細(xì)胞的最低致死濃度為500ug/ml。
　　 （2）將HBx基因轉(zhuǎn)入L02肝細(xì)胞中，以500ug/ml G418篩選出轉(zhuǎn)染HBx的陽性克隆L02細(xì)胞。以RT-PCR和western-blot檢測HBx mRNA和蛋白的表達(dá)，確保成功建立轉(zhuǎn)染HBx基因的L02 (L02/HBX)細(xì)胞系。
　　 （3）轉(zhuǎn)染HBx基因的L02細(xì)胞中PDCD5mRNA和蛋白中的表達(dá)水平上調(diào)。
　　 [結(jié)