ID1促進(jìn)乙肝病毒蛋白在乙肝相關(guān)肝癌中的表達(dá).pdf

1、背景和目的：肝癌是全球范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一，而乙肝病毒復(fù)制不能被抑制是原發(fā)性肝細(xì)胞癌的重要病因。我國是 HBV感染高發(fā)區(qū)，HBV病毒感染率很高。HBV病毒是基因組比較小的DNA病毒，約為3.2 kb，編碼包括S、X、P、C在內(nèi)的多種蛋白，其中S蛋白是乙肝表面抗原，是臨床檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)之一；而HBV編碼的X蛋白對于HBV病毒DNA復(fù)制很重要，能直接影響HBV的復(fù)制。研究表明，作為分化因子的ID1蛋白（能和具有HLH結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子競爭性的結(jié)

2、合DNA）在包括肝癌、乳腺癌等多種癌癥中出現(xiàn)異常表達(dá)，最近有報(bào)道ID1在肝癌組織中與HBx蛋白出現(xiàn)了共定位表達(dá)。但迄今為止ID1對HBx的功能尤其對HBV復(fù)制的影響未見報(bào)道，因此本文將以此為中心展開研究。
　　方法：運(yùn)用免疫組化檢測肝癌組織連續(xù)切片中的ID1和HBs的表達(dá)情況，然后進(jìn)行連續(xù)切片分析；用Western Blot檢測在293T、Hep3B中ID1高表達(dá)對HBx的影響；采用定量PCR檢測ID1對HBx和HBs轉(zhuǎn)錄的影響，

3、并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；在293T細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pHBx和pID1質(zhì)粒，并用放線菌酮處理后，進(jìn)行Western Blot檢測蛋白變化，并采用Odyssey程序進(jìn)行定量分析，將獲得的數(shù)據(jù)繪制成蛋白半衰期曲線，進(jìn)行對比分析；在293T細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 pEGFP、pHBx-EGFP和pID1質(zhì)粒，其中pID1采用濃度梯度實(shí)驗(yàn)組，并采用流式檢測信號，用Origin7.5軟件對各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的平均熒光強(qiáng)度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：①在部分肝癌樣本的連續(xù)切片