耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因檢測(cè)的電化學(xué)生物傳感方法研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩56頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)是全球人類細(xì)菌感染的主要病原體。臨床數(shù)據(jù)表明,MRSA感染的快速診斷和早期治療對(duì)控制感染有積極影響。MRSA對(duì)甲氧西林的耐藥機(jī)制主要是由青霉素結(jié)合蛋白(PBP2a)介導(dǎo)的,而這種結(jié)合蛋白的編碼基因是葡萄球菌染色體mec(SCCmec)中的mecA基因,所以通過(guò)檢測(cè)mecA基因中的一段特異性序列就可以快速直接評(píng)估金黃色葡萄球菌對(duì)甲氧西林的耐藥性。本研究分別利用循環(huán)放大技術(shù)和級(jí)聯(lián)識(shí)別策略制備兩種電化

2、學(xué)生物傳感器,從基因水平對(duì)MRSA感染進(jìn)行靈敏特異的檢測(cè),從而促進(jìn)細(xì)菌感染的早期診斷。
  方法:⑴兩種電化學(xué)生物傳感器的制備:基于等溫鏈置換聚合酶反應(yīng)(ISDPR)和底物循環(huán)放大策略構(gòu)建超靈敏的電化學(xué)DNA傳感器;基于級(jí)聯(lián)DNA分支遷移技術(shù)和雙信號(hào)識(shí)別系統(tǒng)構(gòu)建高特異的電化學(xué)DNA傳感器。用電化學(xué)阻抗譜法(EIS)、循環(huán)伏安法(CV)、原子力顯微鏡(AFM)、熒光分光光度法、瓊脂糖凝膠電泳等方法對(duì)傳感器每一步的修飾進(jìn)行表征。⑵分析

3、電化學(xué)DNA傳感器的可行性并優(yōu)化其重要實(shí)驗(yàn)條件:如探針的固定順序、比例、時(shí)間、溫度和濃度,聚合酶的濃度和反應(yīng)溫度等。⑶傳感器性能考察及樣本檢測(cè):考察兩種傳感器的分析性能,如檢測(cè)線性范圍、最低檢測(cè)限、特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性等。利用簡(jiǎn)單的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制輸出電化學(xué)信號(hào),用方波伏安法(SWV)檢測(cè)電化學(xué)信號(hào)。
  結(jié)果:①用不同的方法對(duì)兩種電化學(xué)生物傳感器的制備過(guò)程進(jìn)行表征,不同方法共同驗(yàn)證電極的成功修飾和制備。②基于ISDPR技術(shù)的電化學(xué)

4、生物傳感器各項(xiàng)性能:可靈敏地檢測(cè)mecA基因;線性范圍為0.075-200 pM;最低檢測(cè)限為63 pM;重復(fù)性和穩(wěn)定性良好。③基于級(jí)聯(lián)DNA分支遷移技術(shù)的電化學(xué)生物傳感器各項(xiàng)性能:本檢測(cè)方法展現(xiàn)了良好的分析性能;最低檢測(cè)限是85 pM;具有高的單堿基突變識(shí)別能力。
  結(jié)論:分別采用目標(biāo)物循環(huán)放大策略和自發(fā)性的DNA分支遷移技術(shù)構(gòu)建兩種新穎電化學(xué)生物傳感器來(lái)檢測(cè)MRSA中的mecA基因。在ISDPR的信號(hào)放大作用下,顯著地提高了

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論