小分子化合物J2緩釋劑型藥代動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究和比較小分子化合物J2兩種緩釋劑型.海藻酸鈉微球（Sodium alginate microspheres，SAM）及納米混懸液（nano-suspension，NS）在體外釋放情況和體內(nèi)眼部藥代動(dòng)力學(xué)行為，觀察J2-NS結(jié)膜下注射對(duì)大鼠角膜移植排斥反應(yīng)的作用并驗(yàn)證其作用機(jī)理。
　　 方法：①體外釋藥性能研究：光學(xué)顯微鏡觀察J2-SAM的形態(tài)及大?。患す饬６葤呙鑳x測(cè)量J2-NS的粒徑：高效液相色譜法測(cè)定J2-SAM和J

2、2-NS的載藥量以及在體外的累積釋放量。②體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究：實(shí)驗(yàn)兔結(jié)膜下注射J2-SAM和J2-NS，分別于注藥后1d、3d、1w、2w、3w、4w后取角膜、房水、虹膜以及外周血，使用高效液相色譜儀檢測(cè)組織內(nèi)的藥物濃度，并使用WinNonlin藥代動(dòng)力學(xué)軟件計(jì)算主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。③藥效學(xué)研究：成年雌性Wistar大鼠為供體，SD大鼠為受體，建立同種異體穿透性角膜移植模型。手術(shù)大鼠隨機(jī)分成4組：A組為SD大鼠自體角膜移植結(jié)膜下空白溶

3、劑0.05ml注射組，16只；B組為同種異體角膜移植結(jié)膜下空白溶劑0.05ml注射組16只：C組為同種異體角膜移植結(jié)膜下空白溶劑0.05ml注射和1％CsA點(diǎn)眼組每日5次，16只；D組同種異體角膜移植結(jié)膜下注J2-NS 0.05mL，16只。術(shù)后記錄植片排斥指數(shù)（RI），比較各組大鼠角膜植片生存時(shí)間。角膜移植后7d、14d分別對(duì)各組大鼠術(shù)眼及同側(cè)頜下淋巴結(jié)行病理學(xué)檢查。④機(jī)理研究：以成年雌性Wistar大鼠作為供體，SD大鼠作為受體，建

4、立同種異體穿透性角膜移植模型。A組為正常SD大鼠結(jié)膜下空白溶劑0.05ml注射組，6只。手術(shù)大鼠隨機(jī)分成3組：B組為SD大鼠自體角膜移植結(jié)膜下空白溶劑0.05ml注射組，6只；C組為同種異體角膜移植結(jié)膜下空白溶劑0.05ml注射組6只；D組同種異體角膜移植結(jié)膜下注射1％J2-NS納米混懸液0.05ml，6只。各組動(dòng)物分別于術(shù)后3d、1w、2w、3w，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血中T細(xì)胞亞群分布情況并比較。
　　 結(jié)果：①體外釋藥性能

5、研究：J2-SAM和J2-NS平均粒徑分別為165.61±37.943μm和170nm；載藥量分別為0.12％和0.1％，兩種緩釋劑型在體外均有顯著的緩釋效果，釋藥量平穩(wěn)，基本上沒有突釋，緩釋時(shí)間持續(xù)30d以上；30d時(shí)累計(jì)釋放分別39.19％和32.91％。②體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究：J2-SAM和J2-NS兔結(jié)膜下注射后，在各組織內(nèi)緩慢均勻釋放，在角膜藥物濃度最高，在房水和虹膜內(nèi)的藥物濃度較低，全血中可以檢測(cè)到藥物濃度，在眼局部可以達(dá)到長(zhǎng)

6、期緩釋效果。③藥效學(xué)研究：A組在觀察期內(nèi)未發(fā)生排斥；B、C、D組生存時(shí)間分別為10.75±1.60d、16.00±3.79d和14.33±2.93d，C、D兩組間比較無顯著性差異，與A、B組比較均有顯著性差異。角膜同種異體移植術(shù)后7d角膜基質(zhì)主要由多形核白細(xì)胞浸潤為主，14d時(shí)則以淋巴細(xì)胞浸潤為主，D組術(shù)后角膜植片各組織層中細(xì)胞成分和新生血管均較同期B組少。角膜同種異體移植術(shù)后移植同側(cè)的頜下淋巴結(jié)增生明顯，但用藥組弱于未用藥組。免疫組化

7、A組角膜未見CD4+、CD8+T細(xì)胞浸潤，角膜移植術(shù)后角膜基質(zhì)層可見核膜棕黃色物質(zhì)沉積的T細(xì)胞，同側(cè)頜下淋巴結(jié)內(nèi)淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)及濾泡問區(qū)陽性細(xì)胞增多，以B組最為明顯。④機(jī)理研究：B組各時(shí)間點(diǎn)外周血中淋巴細(xì)胞總CD3+T淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞以及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞無顯著性差異；C組術(shù)后3d和1w總CD3+T淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞無顯著性差異，1w和2w總CD3+T淋巴細(xì)胞、CD

8、4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)目增多，差異有顯著性；D組中，1w和2w時(shí)CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞無顯著增生。同一時(shí)間點(diǎn)橫向比較：3d、1w、2w時(shí)D組總CD3+T淋巴細(xì)胞明顯少于C組，有顯著性差異，而在第3w時(shí)D組與C組無明顯差別；CD4+T淋巴細(xì)胞在術(shù)后3d和1w時(shí)D組較C組比較數(shù)目少，但無顯著性差異。CD4+/CD8+比值，在3d、1w、3w時(shí)D組與C藥組比較均無顯著性差異。
　　 結(jié)論：①J2-SAM和

9、J2-NS粒徑均勻是良好的藥物載體，體外有良好的緩釋效應(yīng)。②結(jié)膜下單次注射J2-SAM和J2-NS可以在眼部緩慢均勻的釋放，長(zhǎng)期維持穩(wěn)定的藥物濃度，兩者藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)無顯著性差異，但J2-Ns較J2-SAM更方便注藥和更易控制給藥劑量。③J2-NS結(jié)膜下注射有抗大鼠角膜移植排斥作用，效果與CsA相似。J2 J2-NS結(jié)膜下注射可見減輕角膜移植術(shù)后角膜植片和同側(cè)頜下淋巴結(jié)的細(xì)胞增生，抑制免疫應(yīng)答。④大鼠自體角膜移植并不引起外周血T淋巴細(xì)胞