干擾素α-2b PLGA緩釋微球藥代動力學(xué)及藥效學(xué)研究.pdf

1、干擾素α(Interferon-alpha，IFNα)是具有廣譜的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性的蛋白質(zhì)。IFNα是第一個經(jīng)FDA批準用于臨床的基因重組細胞因子，對慢性乙肝、丙肝、慢性粒細胞白血病、腎細胞癌等疾病有明確的治療作用，是目前公認最為有效的抗病毒、抗腫瘤細胞因子。IFNα生物半衰期短，t1/2為2～6小時，消除快，常規(guī)給藥方式是肌注或皮下注射。臨床應(yīng)用IFNα往往根據(jù)不同治療目的頻繁給藥以維持其藥效，而且治療周期較長，這給病人用

2、藥帶來很大的不便。 為了延長IFNα一次給藥的作用時效，減少給藥次數(shù)，提高病人用藥的順應(yīng)性，本實驗室采用無水法制備了IFNα-2bPLGA緩釋微球。本文對IFNα-2bPLGA緩釋微球在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)及其在人腎細胞癌裸鼠移植瘤模型中抑制腫瘤生長的藥效學(xué)進行了研究。 本文首先建立了雙抗體夾心ELISA法測定大鼠血清樣品中IFNα-2b的濃度的方法學(xué)。IFNα-2b在14～875pg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0

3、.9942,回歸方程為Y=0.0022x+0.0699,最低檢測濃度為14pg/ml。三種濃度的平均方法回收率為98.342±1.329％，日內(nèi)和日間RSD分別為3.434±2.284％和4.381±2.603％。該方法有靈敏度高、特異性和專屬性強等特點，商品化試劑盒使得實驗操作簡便易行。 SD大鼠單次皮下注射IFNα-2bPLGA微球和IFNα-2b注射劑后于不同時間點取血，用上述建立的雙夾心ELISA法測定血清中IFNα-2

4、b的濃度，采用3P87藥動學(xué)軟件進行血藥濃度-時間曲線擬合及藥動學(xué)參數(shù)計算。結(jié)果表明，①SD大鼠單劑量皮下注射低劑量IFNα-2b注射劑(8.8×106pg/kg2.7×105IU)后血藥濃度消除較快，12h就已基本檢測不到血清藥物濃度，達峰時間(Tmax)為1h(0.042d)，達峰濃度(Cmax)為4042.87pg/ml，平均滯留時間(MRT)為0.08d(1.92h)，AUC0～∞為382.382pg·d/ml；②SD大鼠單劑量

5、皮下注射中劑量(5.3×107pg/kg1.62×106IU)IFNα-2bPLGA微球和IFNα-2b注射劑后，微球經(jīng)過突釋達到峰濃度，隨后藥物濃度呈緩慢下降趨勢，并長時間維持較低水平，28天后還可檢測到微量藥物；注射劑組血藥濃度消除較快，與低劑量組相似，中劑量兩組Tmax分別為0.167d(4h)和0.063d(1.5h)，Cmax為5490.228和25315.32pg/ml，MRT為6.855和0.099d，AUC0～∞為231

6、49.018和2309.497pg·d/ml；③SD大鼠單劑量皮下注射高劑量IFNα-2bPLGA微球(2.7×108pg/kg8.1×106IU)后，也經(jīng)歷突釋后達峰，隨后血藥濃度緩慢下降，28天后仍可檢測到低水平血藥濃度。其Tmax為0.167d(4h)，Cmax為12660.92pg/ml，MRT為7.945d，AUC0～∞為76804.547pg·d/ml。IFNα-2bPLGA微球和IFNα-2b注射劑血藥濃度實驗數(shù)據(jù)均符合單

7、室模型。中劑量組實驗數(shù)據(jù)說明，等劑量微球和注射劑給藥后達峰時間(Tmax)、達峰濃度(Cmax)、平均滯留時間(MRT)和AUC0～∞均具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)，微球具有較好的緩釋作用，并具有良好的體內(nèi)外釋藥相關(guān)性。 本文進行了體外IFNα-2b抑制人腎細胞癌786-0細胞生長的藥效學(xué)實驗。MTT法結(jié)果表明，IFNα-2b對786-0細胞有明顯的抑制生長作用，并具有劑量依賴性。經(jīng)流

8、式細胞術(shù)檢測，IFNα-2b主要通過誘導(dǎo)凋亡抑制786-0細胞生長。隨后，本文建立了人腎細胞癌裸鼠移植瘤IFNα-2bPLGA微球藥效學(xué)模型。模型建成后，將荷瘤裸鼠分為IFNα-2bPLGA微球、IFNα-2b注射劑以及空白治療組。微球組和注射劑組分別皮下注射給藥，之后每4天用游標卡尺測量腫瘤大小，觀察裸鼠皮下腫瘤生長情況，通過公式W=ab2/2估算裸鼠腫瘤重量。實驗表明，28天實驗結(jié)束后，IFNα-2b注射劑組(W=38.74±14.