新型抗白血病化合物FB2臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、FB2是一種新型Abl/Src雙重酪氨酸激酶抑制劑，屬于噻唑嘧啶胺類化合物。藥理學(xué)研究表明，F(xiàn)B2可抑制伊馬替尼耐藥細(xì)胞株（K562/G5.0和K562/G01）、人前列腺癌細(xì)胞DU145和人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖，還可明顯延長(zhǎng)K562/G5.0細(xì)胞NOD/SCID小鼠和Ba/F3p210（WT和Y253F）白血病小鼠的生存期。此外，F(xiàn)B2還可抑制Ba/F3P210WT及Y253F細(xì)胞Bcr/Abl、c-Src和Lyn蛋白

2、的磷酸化水平，對(duì)Src激酶活性的抑制作用強(qiáng)于達(dá)沙替尼。由此可見(jiàn)，F(xiàn)B2作為一種新型、有效的抗白血病化合物，有望成為治療伊馬替尼耐藥CML的新藥。
　　 本研究根據(jù)臨床前藥代動(dòng)力學(xué)指導(dǎo)原則，建立了生物樣品中FB2及代謝產(chǎn)物的LC-MS/MS分析方法，該方法簡(jiǎn)便、可靠、靈敏度高、特異性強(qiáng)，可滿足FB2的臨床前藥動(dòng)學(xué)研究。應(yīng)用LC-MS/MS方法檢測(cè)并分析大鼠口服和靜脈注射FB2后的體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄的藥代動(dòng)力學(xué)特征；鑒定參與

3、FB2代謝的Ⅰ相和Ⅱ相同工酶業(yè)型以及產(chǎn)物生成的相關(guān)性；研究FB2與藥物代謝酶/P-糖蛋白相互作用以及Beagle犬口服不同F(xiàn)B2制劑的藥代特征比較等，為臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究和合理用藥提供參考依據(jù)。
　　 研究結(jié)果表明：
　　 1．雄雌大鼠口服FB2(9、18、36mg/kg)后Smin血中均可檢測(cè)到原型藥和代謝物，12～24h血藥濃度接近檢測(cè)限。雄鼠低、中、高劑量組FB2的Cmax分別為83.62、245.60和202.8

4、0ng/mL，Tmax為0.3、0.35和0.38h，AUC(0-t)為117.03、402.68和440.53μg/L*h，MRT(0-t)為2.07、4.11和4.32h。FB2的Cmax、AUC(0-t)與口服劑量不成比例，MRT(0-t)無(wú)明顯改變，提示FB2在雄鼠體內(nèi)可能存在吸收飽和現(xiàn)象。代謝物FB7的Cmax分別為32.32、63.40和69.94ng/mL，Tmax為1.20、0.45和0.85h。AUC(0-t)為139

5、.01、288.60和486.13μg/L*h，MRT(0-t)為3.95、5.30和6.92h;FI310的Cmax分別為156.80、310.20和277.60ng/mL，Tmax為0.30、0.30和0.25h，AUC(0-t)為535.30、1160.90和1769.86μg/L*h，MRT(0-t)為4.56、6.05和7.80h。代謝物FB7和FB10的Cmax與口服劑量不呈比例，但AUC(0-t)與口服劑量呈比例關(guān)系（R2

6、=0.9878和0.9613），MRT(0-t)隨給藥劑量增加而延長(zhǎng)。提示代謝物在雄鼠體內(nèi)可能存在一定的消除飽和現(xiàn)象。
　　 雌鼠口服FB2（9、18、36mg/kg）后，低、中、高劑量組FB2的Cmax分別為46.84、170.70和493.80ng/mL，AUC(0-t)分別為144.29、528.09和1933.35μg/L*h，MRT(0-t)為5.24、7.15和6.23h;FB7的Cmax分別為22.60、57.84

7、和110.56ng/mL，AUC(0-t)為128.19、385.11和1054.63μg/L*h，MRT(0-t)為5.63、6.95和6.71h;FB10的Cmax分別為119.96、209.40和339.20ng/mL，AUC(0-t)為645.46、1344.85和2928.96μg/L*h，MRT(0-t)為5.79、7.42和7.11h。雌鼠FB2、FB7和FB10的Cmax和AUC(0-t)與給藥劑量基本呈正比(R2=0.

8、9836-0.9991)，MRT(0-t)并未隨劑量增加而延長(zhǎng)，提示FB2和代謝物FB7、FB10在雌鼠體內(nèi)的代謝基本符合線性動(dòng)力學(xué)特征。
　　 雌鼠FB2(36mg/kg)的口服生物利用度為11.96％，雄鼠為3.04%。
　　 雌鼠各劑量組FB2及代謝產(chǎn)物的AUC(0-t)和MRT(-t)高于雄鼠，提示FB2在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)存在明顯性別差異。
　　 雄鼠口服FB2(9mg/kg)后，F(xiàn)B2、FB7和FB

9、10自糞便的回收量分別為口服劑量的13.56%、11.37%和69.93%，雌鼠糞便中回收量分別為6.89%、12.20%和64.19%，膽汁和尿液中排泄較少。
　　 FB2和代謝物在體內(nèi)分布廣泛，雄鼠給藥8min后，組織和器官中藥物濃度排序?yàn)椋何福拘∧c＞脾＞肝臟＞脂肪＞腎上腺＞肺＞附睪＞肌肉＞骨髓-腎臟＞睪丸＞血漿＞心臟＞腦，15min和2h后FB2在脂肪組織的分布明顯減少。給藥后各時(shí)間點(diǎn)代謝物在肝臟、脾、腎上腺和消化道分布較

10、多。雌鼠給藥8min后，組織和器官中原型藥濃度排序?yàn)椋何福靖闻K＞小腸＞骨髓＞腎上腺＞肌肉＞肺＞脾＞心臟＞卵巢＞子宮＞血漿＞腎臟＞脂肪＞腦，15min和2h的分布趨勢(shì)與8min相似。代謝物在肝臟、腎上腺、消化道等組織分布較多，各時(shí)間點(diǎn)分布趨勢(shì)基本相同。
　　 FB2體外與大鼠、犬、人和猴血漿蛋白高度結(jié)合，結(jié)合率約為96.45～100%，無(wú)明顯種屬差異。
　　 2．Beagle犬口服FB27#制劑（12mg/kg）后15～3

11、0min血中即可測(cè)到原型藥，12～24hFB2血藥濃度仍高于檢測(cè)限。雄犬FB2、FB7和FB10的Cmax分別為91.15、66.98和7.41ng/mL，Tmax分別為3.67、3.67和2.33h;雌犬FB2、FB7和FB10的Cmax分別為29.93、31.71和8.11ng/mL，Tmax分別為3、2和0.75h。雄犬FB2及代謝產(chǎn)物的AUC(0-t)、Tmax和MRT(0-t)均明顯高于雌犬，提示可能存在性別差異。Beagle

12、犬口服7#制劑45min后，除(♂)1正常外，其余各只頭部和前肢均明顯腫脹，精神萎靡，1～2h后癥狀逐漸消失，恢復(fù)正常。
　　 與7#制劑相比，8#制劑（12mg/kg）的Cmax和AUC(0-t)明顯升高，MRT(0-t)、Tmax和t1/2z縮短，提示8#制劑在Beagle犬體內(nèi)吸收和消除較快，無(wú)明顯性別差異，也無(wú)7#制劑的不良反應(yīng)。
　　 3．FB2在犬、人、猴和大鼠肝微粒體溫孵1h后分別減少17%、15%、96%

13、和58%。在大鼠/人肝微粒體中可代謝生成多個(gè)代謝產(chǎn)物，包括氧化代謝物：FB7和FB10（m/z=610/472），原型藥的葡萄糖醛酸結(jié)合物：G1(m/z=770/456)和氧化代謝物的葡萄糖醛酸結(jié)合物：G2和G3（m/z=786/472）。FB2在大鼠和人肝微粒體中生成的代謝產(chǎn)物的類型和數(shù)目基本一致，但產(chǎn)物的相對(duì)豐度不同。大鼠口服FB2(9mg/kg)后的尿液、膽汁、血漿和糞便中均可檢測(cè)到氧化代謝物：FB7和FB10（m/z=610/4

14、72）、氧化代謝物的葡萄糖醛酸結(jié)合物G4(m/z=786/472)及硫酸結(jié)合物S1(m/z=690/472)。此外，在尿液、膽汁和血漿中還檢測(cè)到另一氧化代謝物：FB3（m/z=610/472）。各體內(nèi)樣品中均未檢測(cè)到原型藥的Ⅱ相結(jié)合產(chǎn)物。FB2在犬、人、猴和大鼠血漿中均穩(wěn)定。
　　 4．參與FB2生物轉(zhuǎn)化的大鼠肝臟CYP450主要同工酶為CYP3A2和2E1,2C11、1A2、2C6和2D2部分參與，代謝產(chǎn)物主要為FB7和FB1

15、0。人源CYP3A4是參與FB2體外代謝生成FB7和FB10的主要同工酶，2C9部分參與。Ⅱ相代謝酶UGT1A1、1A4、1A9和287是參與FB2-G生成的主要同工酶；1A4、1A9和287主要催化FB7-G生成；1A1和2B7主要催化FB10代謝生成FB10-G。
　　 5．FB2(10μM)經(jīng)Caco-2細(xì)胞的吸收滲透系數(shù)(PappA-B)為13.99×10-6cm/s，提示FB2是一種高滲透性藥物。FB2、FB7和FB1

16、0的PappB-A均高于PappA-B，當(dāng)加入P-gp抑制劑LSN335984后外排率明顯降低，提示FB2、FB7和FB10均是P-gp底物，MDCK-MDR1細(xì)胞研究進(jìn)一步確認(rèn)FB2為P-gp底物。在大鼠single-pass腸灌注液中加入P-gp抑制劑LSN335984后，F(xiàn)B2代謝率略降低，F(xiàn)B2的Pblood和血中代謝物FB7、FB10累積量均明顯升高。大鼠口服FB2(18mg/kg)后，F(xiàn)oral僅為5.7%，聯(lián)用P-gp抑制

17、劑維拉帕米后，F(xiàn)oral提高到24.52%，代謝物FB7和FB10的AUC(0-t)和Cmax也明顯增高。以上結(jié)果表明，抑制P-gp可以減少FB2和代謝物（FB7和FB10）的外排，從而促進(jìn)FB2和代謝物在腸道的吸收。因此，P-gp對(duì)腸道FB2的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)影響是FB2口服生物利用度低的主要因素之一。
　　 6．Caco-2細(xì)胞模型中加入FB2、FB7和FB10（10μM）后，地高辛的ER值降低74%、71.6%和29.2%，提示

18、FB2、FB7和FB10對(duì)P-gp產(chǎn)生不同程度的抑制作用。FB2、FB7和FB10（1、5、10μM）處理Caco-2細(xì)胞72h后發(fā)現(xiàn)FB2對(duì)P-gp并無(wú)誘導(dǎo)作用，卻表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，ER值分別下降43.8%、52%和83%。加入FB7（1、5、10μM）和FB10（1、5μM）后對(duì)P-gp誘導(dǎo)作用較弱。
　　 7．FB2（1-10μM）對(duì)體外大鼠肝CYP4506個(gè)同工酶(CYP1A2、3A2、2C6、2C11、2D2和2E

19、1）均有不同程度的抑制作用，抑制率為21.81～52.95%不等。FB2(1-10μM)體外對(duì)人肝CYP2D6、2E1和3A4的抑制率分別為17.58～54.55%不等，對(duì)1A2、2C9和2C19影響較小。FB2（1-10μM）對(duì)人肝UGT1A1、1A4、1A9和2B7抑制率為5.14～44.44%;FB7對(duì)UGT1A1、1A4和2B7抑制率為3.7%～40.7%，對(duì)1A9無(wú)明顯影響。FB10對(duì)UGT1A1，1A4，1A9和2B7抑制率