長循環(huán)靶向性載藥膠束的構建及其細胞水平評價.pdf

1、聚合物膠束是當前藥物傳輸領域研究的熱點，在用作藥物載體時具有多個優(yōu)點，如對疏水性或難溶性藥物的增溶作用，聚合物親水鏈由一定長度的聚乙二醇等組成時可具備長循環(huán)性，而在聚合物膠束的表面修飾以靶識別分子可使其具備主動靶向性。本文制備了載香豆素6和米托蒽琨的聚合物膠束，并研究了地塞米松處理對Hela細胞攝取葉酸偶聯(lián)載香豆素6膠束的影響。
　　 首先，以雙氨基PEG（PEG-bis-amine）、葉酸(folate)、磷脂酰乙醇胺(1，2

2、-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphatidylethanolamine，DSPE)為原料合成了葉酸-PEG-磷脂酰乙醇胺(folate-PEG-DSPE)，并利用傅立葉紅外波譜儀和核磁共振譜儀對終產物進行了結構表征，結果證實所得到的終產物為目標化合物;還利用高效液相色譜法對得到的終產物進行了含量分析;然后，以甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(mPEG-DSPE)和合成的葉酸-PEG-磷脂酰乙醇胺(folate-

3、PEG-DSPE)為材料，通過膜水化法制備出載香豆素6(coumarin6)的普通膠束(plain micelles)和葉酸偶聯(lián)膠束(folate-conjugated micelles)。分別采用透射電鏡和激光粒度分析儀對膠束的形態(tài)和粒徑分布進行了檢測，發(fā)現(xiàn)透射電鏡下的干燥膠束粒徑約50-60nm，而溶液狀態(tài)下的膠束平均粒徑約100nm;還利用高效液相色譜法分別檢測了膠束溶液的香豆素6濃度，并計算出了聚合物膠束的載藥量和包封率分別約為

4、0.8％和15.4％;此外，還利用高效液相色譜法檢測了葉酸偶聯(lián)膠束中的folate-PEG-DSPE，實驗結果表明，膜水化法是制備載藥聚合物膠束的適宜方法，所制備的葉酸偶聯(lián)膠束含有folate-PEG-DSPE。實驗結果還表明，聚合物膠束對于疏水性小分子藥物具有顯著的增溶作用;
　　 其次，以甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺為材料，利用膜水化法制備包載水溶性較好的蒽環(huán)類抗腫瘤藥米托蒽醌鹽酸鹽(mitoxantrone hydroch

5、loride)的聚合物膠束，考察了磷脂酰乙醇胺對米托蒽琨包封率和載藥量的影響。動態(tài)光散射法考察了膠束的粒徑分布，其平均粒徑約10nm;發(fā)現(xiàn)磷脂酰乙醇胺的添加可以使聚合物膠束對米托蒽醌的包封率和載藥量增加達23％左右;
　　 然后，考察了葉酸受體α陽性的Hela細胞對載香豆素6的普通膠束和葉酸偶聯(lián)膠束的體外攝取實驗，利用熒光顯徼鏡和流式細胞儀考察Hela細胞對于葉酸偶聯(lián)膠束的攝取作用，發(fā)現(xiàn)Hela細胞對于葉酸偶聯(lián)膠束的攝取明顯高于

6、普通膠束，證明通過葉酸小分子與細胞表面的葉酸受體α的特異性識別和結合作用，可以促進細胞對于葉酸偶聯(lián)載藥膠束的攝取;
　　 最后，研究了地塞米松處理對于Hela細胞攝取載香豆素6的葉酸偶聯(lián)膠束的影響。利用多個劑量(5nM，50nM，100nM)的地塞米松處理Hela細胞96h，并用實時定量PCR技術和流式細胞技術分別檢測了處理后Hela細胞的mRNA水平和細胞表面FRα水平，發(fā)現(xiàn)地塞米松處理后的Hela細胞的mRNA水平增加了近3

7、倍，而Hela細胞表面FRα水平增加了1倍多;在5nM地塞米松處理96h的Hela細胞中加入葉酸偶聯(lián)膠束，以未經(jīng)處理的Hela細胞為對照，采用熒光顯微鏡和流式細胞儀考察細胞攝取量，發(fā)現(xiàn)地塞米松處理的Hela細胞對葉酸偶聯(lián)膠束的攝取增加了近1倍，也即說明通過上調細胞表面FRα水平可以增強葉酸偶聯(lián)膠束在腫瘤細胞的內吞。
　　 本研究成功制備了載香豆素6的普通膠束和葉酸偶聯(lián)膠束，動態(tài)光散射法檢測的平均粒徑約100nm;此外，還制備了載