雙靶向融合蛋白標記的紅細胞膜包裹PLGA微球載藥系統(tǒng)制備及其體內(nèi)外腸癌靶向性評價.pdf

1、一些傳統(tǒng)化療藥物會因其在體內(nèi)非特異性分布而造成全身毒性作用以及副反應發(fā)生。藥物載體的出現(xiàn)克服了傳統(tǒng)藥物的非特異性靶向，將藥物遞送并蓄積于目標組織內(nèi)再發(fā)揮緩釋作用，從而提高藥物療效。近來，天然生物材料與人工合成材料的聯(lián)合運用受到眾多關(guān)注。由此衍生出的天然生物膜包裹的納米載體作為一種新型藥物遞送系統(tǒng)，更適于個體化醫(yī)療趨勢發(fā)展，在許多疾病診療方面有著巨大應用潛能。
　　研究目的：
　　1、構(gòu)建anti-EGFR-iRGD融合蛋白標

2、記的紅細胞膜包裹PLGA微球載藥系統(tǒng)，對其進行表征并評價該微球載體體外穩(wěn)定性。
　　2、體外實驗評價該微球載體對腸癌的穿透能力。
　　3、體內(nèi)實驗評價該微球載體對腸癌的靶向能力。
　　研究方法：
　　1、采用低滲破膜、超聲、擠壓的方法獲取紅細胞膜囊泡，與復乳法制備得到的PLGA微球共同超聲、擠壓后獲得紅細胞膜包裹的PLGA微球。使用化學反應共價連接anti-EGFR-iRGD融合蛋白與脂質(zhì)，通過脂化后的融合蛋白脂

3、質(zhì)端插入紅細胞膜磷脂雙分子層內(nèi)，最終獲得anti-EGFR-iRGD融合蛋白標記的紅細胞膜包裹PLGA微球載藥系統(tǒng)。通過透射電子顯微鏡(TEM)觀察載體形態(tài)，動態(tài)激光散射儀(DLS)測量載體粒徑、電位、多分散系數(shù)(PDI)，驗證載體體外穩(wěn)定性。
　　2、蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)分別檢測三組腸癌細胞（SW480、HT29、Caco-2）的EGFR蛋白表達情況。
　　3、建立體外腸癌多細胞球(MCS)模型，利用熒

4、光顯微鏡、共聚焦顯微鏡觀察載體對腸癌細胞的穿透能力。
　　4、建立荷腸癌細胞裸鼠模型，利用小動物近紅外成像技術(shù)觀察載體體內(nèi)腸癌靶向能力。
　　研究結(jié)果：
　　1、成功制備anti-EGFR-iRGD融合蛋白標記的紅細胞膜包裹PLGA微球載體，透射電鏡觀察微球形態(tài)完整，大小均勻。DLS測得載體帶負電荷，粒徑約為180nm，一周內(nèi)粒徑、PDI未見明顯改變，說明該微球載體有較好的體外穩(wěn)定性。
　　2、選取的三株腸癌細胞

5、株中，HT29、Caco-2細胞株高表達EGFR，用作后續(xù)體內(nèi)外腫瘤模型建立。
　　3、體外穿透性實驗中，使用熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡均可觀察到負載熒光染料的anti-EGFR-iRGD-RBCm-PLGA微球載體由外至內(nèi)分布于HT29MCS中，證明該載體具備較好的腫瘤穿透能力。
　　4、體內(nèi)靶向性實驗中，使用近紅外成像系統(tǒng)觀察到anti-EGFR-iRGD-RBCm-PLGA微球載體于尾靜脈給藥24h后富集在荷腸癌細胞Ca