腫瘤細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞雙靶向的白蛋白納米載藥系統(tǒng)治療耐藥結(jié)腸癌的研究.pdf

1、多藥耐藥（Multidrug resistance,MDR）的產(chǎn)生是現(xiàn)階段腫瘤治療的主要瓶頸問題。MDR不僅是癌細(xì)胞單獨作用的結(jié)果，而且腫瘤微環(huán)境在MDR的產(chǎn)生和維持過程中也發(fā)揮著重要的作用。MDR是腫瘤細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境中多種基質(zhì)細(xì)胞間相互作用的結(jié)果。因此，對癌細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境采取雙重干預(yù)有可能改善MDR腫瘤的療效。本研究設(shè)計了一個靶向腫瘤高表達(dá)營養(yǎng)轉(zhuǎn)運體（如：SPARC,MR和GLUT-1）的納米載藥系統(tǒng)來治療耐藥結(jié)腸癌，并研究其作用

2、機制以及抗腫瘤效果。
　　聯(lián)合用藥是克服腫瘤化療耐藥的一個重要方法。本研究發(fā)現(xiàn)雙硫侖/銅絡(luò)合物（DSF/Cu）和瑞格菲尼（Rego）聯(lián)合應(yīng)用可以有效抑制耐藥結(jié)腸癌細(xì)胞的生長。因此，本研究采用了NaBH4-H2NCONH2還原變性法，制備共載DSF/Cu和Rego的白蛋白納米粒，并通過腫瘤細(xì)胞及基質(zhì)過表達(dá)白蛋白轉(zhuǎn)運受體（例如，SPARC）靶向輸送至腫瘤組織。同時，還發(fā)現(xiàn)了耐藥結(jié)腸癌細(xì)胞高表達(dá)甘露糖受體（Mannose recepto

3、rs,MR），因此在納米粒表面修飾甘露糖苷（Man），令納米給藥系統(tǒng)可以通過靶向MR，進(jìn)一步提高藥物在腫瘤組織的富集，從而通過雙重靶向作用改善抗腫瘤療效。本研究從細(xì)胞攝取、體外腫瘤球滲透、腫瘤組織分布等多方面考察了納米粒被腫瘤細(xì)胞攝取和腫瘤穿透能力。通過細(xì)胞毒性、腫瘤細(xì)胞凋亡、細(xì)胞內(nèi)ROS檢測、自噬水平檢測，抗腫瘤血管新生等多種方面研究探討了納米給藥系統(tǒng)的作用機制。并在耐藥結(jié)腸癌皮下移植瘤小鼠模型上進(jìn)行體內(nèi)治療實驗。
　　實驗結(jié)果

4、表明，該納米給藥系統(tǒng)的粒徑約為140 nm，能被HCT8/ADR細(xì)胞高效地攝取，有效地抑制腫瘤細(xì)胞增殖。具有雙靶向功能的甘露糖修飾白蛋白納米粒（Man-BSA NP）不僅可以通過EPR效應(yīng)富集于腫瘤部位，還能通過靶向耐藥結(jié)腸癌高表達(dá)的SPARC和MR富集于腫瘤部位。而且，該納米給藥系統(tǒng)還能有效地滲透到腫瘤深處，發(fā)揮抗腫瘤作用。體內(nèi)外機制研究表明，該納米給藥系統(tǒng)能通過增加腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS水平從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬、抑制腫瘤血管

5、新生等多種機制來發(fā)揮抗腫瘤作用。
　　此外，本研究還發(fā)現(xiàn)促腫瘤的M2型巨噬細(xì)胞亦過表達(dá)SPARC和MR。因此，該納米給藥系統(tǒng)還可同時靶向腫瘤微環(huán)境中的M2型巨噬細(xì)胞。通過細(xì)胞毒性、靶向性、腫瘤組織中M2型巨噬細(xì)胞數(shù)量變化等一系列研究，結(jié)果表明Man-BSA NP可通過SPARC和MR介導(dǎo)的機制靶向M2型巨噬細(xì)胞；Rego和DSF/Cu的協(xié)同作用能顯著抑制腫瘤組織中M2型巨噬細(xì)胞數(shù)量，這顯示該納米給藥系統(tǒng)具有調(diào)控腫瘤微環(huán)境的功能。<