NS-398逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞多藥耐藥作用研究.pdf

1、結(jié)腸癌是嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病，且起病隱匿，早期診斷率低。近年來(lái)，結(jié)腸癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，已躍居惡性腫瘤死亡的第四位。目前，其治療方式仍是以手術(shù)、放療和化療為主，其中化療在其治療中占據(jù)重要地位。但是，在化療過(guò)程中腫瘤多藥耐藥(multi-drug resistance，MDR)頻發(fā)，嚴(yán)重影響了化療效果甚至導(dǎo)致化療失敗，從而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)或/和轉(zhuǎn)移，成為腫瘤化療中一個(gè)非常棘手的問(wèn)題。因此，多藥耐藥是目前化療中需要克服的最

2、大難點(diǎn)。
　　本課題以結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株HCT-8/FU為研究對(duì)象，觀察環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）選擇性抑制劑NS-398對(duì)癌細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其對(duì)P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(multi-drug resistance related protein，MRP)、COX-2的調(diào)控，以初步探討其可能作用機(jī)制。通過(guò)CCK-8法檢測(cè)NS-398對(duì)HCT-8/F

3、U的毒性作用及對(duì)MDR的逆轉(zhuǎn)作用;通過(guò)Caspase3活性檢測(cè)試劑盒和Hoechst33342染色觀察藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況;ELISA法檢測(cè)NS-398作用前后培養(yǎng)液中前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)含量的變化;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)NS-398作用前后結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞P-gp、MRP和COX-2的表達(dá)變化。通過(guò)上述研究探討以下幾個(gè)問(wèn)題:探討COX-2選擇性抑制劑NS-398、5-FU的劑量對(duì)耐藥細(xì)胞的毒性作用，并明

4、確NS-398以何種有效劑量逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞的多藥耐藥性;COX-2選擇性抑制劑作為結(jié)腸癌等常見(jiàn)消化道惡性腫瘤化療耐藥逆轉(zhuǎn)劑，探討NS-398是否能夠抑制HCT-8/FU細(xì)胞膜表面的P-gp、MRP和細(xì)胞漿中COX-2的表達(dá)及是否能夠降低細(xì)胞液中PGE2的含量，以初步探討其逆轉(zhuǎn)耐藥的分子機(jī)制。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10、20μmol·L-1 NS-398作用于HCT-8/FU細(xì)胞24h后，HCT-8/FU細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率分別為5％、8％，

5、差異具有顯著性(P＜0.01)，對(duì)癌細(xì)胞均無(wú)明顯毒性，而與不同濃度5-FU合用后，HCT-8/FU細(xì)胞對(duì)5-FU敏感性增加，耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.831倍、7.629倍;通過(guò)Caspase3活性檢測(cè)試劑盒測(cè)得20μmol·L-1 NS-398+320μg·mL-15-FU組Caspase3活性增加百分比為386.11％，較320μg·mL-15-FU組的179.94％、20μmol·L-1 NS-398組的125.23％顯著增加(P＜0

6、.05); Hoechst33342染色結(jié)果同樣顯示兩藥聯(lián)用組HCT-8/FU細(xì)胞核呈致密濃染，細(xì)胞凋亡較單獨(dú)用藥組增加;10μmol·L-1、20μmol·L-1 NS-398作用HCT-8/FU細(xì)胞24h后，ELISA法測(cè)得HCT-8/FU細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PGE2含量分別為189.437ng·L-1、151.282ng·L-1，較0μmol·L-1 NS-398時(shí)的321.659ng·L-1顯著下降(P＜0.05);免疫細(xì)胞化學(xué)法研

7、究結(jié)果發(fā)現(xiàn)20μmol·L-1NS-398作用24h后，HCT-8/FU細(xì)胞膜表面P-gp、MRP表達(dá)均由強(qiáng)陽(yáng)性變?yōu)槿蹶?yáng)性，HCT-8/FU細(xì)胞漿中COX-2表達(dá)由中陽(yáng)性變?yōu)槿蹶?yáng)性。
　　研究結(jié)果表明，COX-2選擇性抑制劑NS-398對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞耐藥性有顯著的逆轉(zhuǎn)作用，能夠增強(qiáng)HCT-8/FU細(xì)胞對(duì)5-FU的敏感性，其逆轉(zhuǎn)機(jī)制可能是在抑制COX-2表達(dá)的同時(shí)抑制P-gp、MRP的表達(dá)，減少化療藥物的外排，其次NS-398能夠抑制