選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑NS-398聯(lián)合奧曲肽抑制結(jié)腸癌的研究.pdf

1、目的：探討選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑NS-398與奧曲肽聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞株Lovo生長(zhǎng)、凋亡的影響，研究?jī)伤幝?lián)用是否具有協(xié)同性及相關(guān)機(jī)制，為臨床治療提供新的思路和理論依據(jù)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組，單純NS-398組（100μmol/L），單純奧曲肽組（1μmol/L）和NS-398聯(lián)合奧曲肽組（以下簡(jiǎn)稱聯(lián)合組，100μmol/L NS-398+1μmol/L奧曲肽），將各組藥物應(yīng)用于體外培養(yǎng)的人結(jié)腸腺癌細(xì)胞株Lovo不同

2、時(shí)間：①觀察生長(zhǎng)曲線的變化；②倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；③四甲基噻唑氮藍(lán)（Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制效應(yīng)；④流式細(xì)胞儀（flow cytometer, FCM）檢測(cè)細(xì)胞周期、凋亡率；⑤透射電鏡（electronic microscopy, EM）觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化及凋亡形態(tài)變化；⑥RT－PCR法檢測(cè)COX-2基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：①藥物作用后，細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制，出現(xiàn)

3、負(fù)增長(zhǎng)，聯(lián)合組作用明顯強(qiáng)于單純用藥組。②倒置顯微鏡下，見(jiàn)正常情況下Lovo細(xì)胞生長(zhǎng)良好，表現(xiàn)為不規(guī)則多邊形，貼壁生長(zhǎng)，呈單層鵝卵石樣緊密排列，有較長(zhǎng)的偽足，可融合成集落，并有多量瘤巨細(xì)胞出現(xiàn)。經(jīng)藥物處理后，細(xì)胞變小、變圓，排列雜亂，細(xì)胞偽足回縮，部分細(xì)胞脫落漂浮于培養(yǎng)液中，出現(xiàn)懸浮現(xiàn)象，瘤巨細(xì)胞減少或不見(jiàn)瘤巨細(xì)胞，聯(lián)合組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變顯著強(qiáng)于單純用藥組，且存在時(shí)間依賴性。③MTT法顯示NS-398和奧曲肽均在一定范圍內(nèi)呈時(shí)間依賴性抑制L

4、ovo細(xì)胞的增殖；聯(lián)合用藥組抑制率顯著高于單一用藥組（P<0.01），提示聯(lián)合用藥有協(xié)同抑制 Lovo細(xì)胞增殖效應(yīng)，并隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)。④FCM檢測(cè)可見(jiàn)藥物影響Lovo細(xì)胞的細(xì)胞周期分布，使G0/G1期比例增高，使S期比例降低，用藥組與對(duì)照組之間，聯(lián)合組與單純用藥組之間差異具有顯著性(P<0.05)。在G0/G1期前出現(xiàn)一亞二倍體峰，確認(rèn)為凋亡峰，聯(lián)合組該峰面積大于單純用藥組，且存在時(shí)間依賴性。同時(shí)，F(xiàn)CM檢測(cè)顯示隨著作用時(shí)間的延

5、長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡率逐漸增加，聯(lián)合組細(xì)胞凋亡率顯著高于單一用藥組（P<0.01）。⑤透射電鏡下正常 Lovo細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，核仁、核膜清晰，染色質(zhì)分布均勻。藥物作用24h后出現(xiàn)細(xì)胞凋亡的形態(tài)改變，主要表現(xiàn)為細(xì)胞核固縮，胞質(zhì)空泡化，出現(xiàn)大小不一的空泡及胞質(zhì)崩解，可見(jiàn)線粒體腫脹，部分細(xì)胞胞膜破裂，核內(nèi)染色質(zhì)聚集于核膜內(nèi)側(cè)呈團(tuán)塊或新月?tīng)?，并可?jiàn)凋亡小體形成。⑥藥物作用于Lovo細(xì)胞后，可以使COX-2基因表達(dá)下調(diào)，聯(lián)合組下調(diào)效果明顯高于對(duì)照組和單一用

6、藥組（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.選擇性COX-2抑制劑NS-398和生長(zhǎng)抑素類似物奧曲肽可以抑制人結(jié)腸腺癌細(xì)胞株Lovo的生長(zhǎng)、增殖，聯(lián)合用藥具有協(xié)同抑制作用，并呈時(shí)間依賴性。2.NS-398、奧曲肽可以誘導(dǎo) Lovo細(xì)胞的凋亡，聯(lián)合用藥顯著提高 Lovo細(xì)胞的凋亡率，呈時(shí)間依賴性，并改變細(xì)胞周期分布，使G0/G1期比例增高，S期比例降低。3.NS-398、奧曲肽和聯(lián)合組對(duì)Lovo細(xì)胞的抑制作用可能與下調(diào)COX-2基因表達(dá)、