選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑預(yù)防酒精性肝病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本試驗(yàn)通過(guò)酒精灌胃建立ALD大鼠模型，并使用COX-2選擇性抑制劑塞來(lái)昔布(Celecoxib)給大鼠灌胃，觀察COX-2在肝組織中的表達(dá)狀況及塞來(lái)昔布對(duì)酒精性肝損傷大鼠肝臟的影響，結(jié)合生化和肝臟病理學(xué)檢查研究COX-2及其抑制劑在酒精性肝損傷中的作用，探討選擇性COX-2抑制劑在預(yù)防ALD發(fā)病過(guò)程中所起的作用，為應(yīng)用塞來(lái)昔布防治本病提供理論依據(jù)。 方法：健康雄性Wistar大鼠30只，體重150-200g，正常飲食馴化一

2、周后隨機(jī)分為三組：模型組和處理組給予酒精(5-9g·kg-1·d-1)灌胃，模型組大鼠加用Celecoxib(20mg·kg-1·d-1)灌胃，另外設(shè)立對(duì)照組不加任何處理。除正常組外其余兩組每日上午9時(shí)酒精灌胃，模型組下午4時(shí)加Celecoxib灌胃，持續(xù)12周。各組均普通顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食，分籠飼養(yǎng)于22±2℃，濕度70％士5％清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。于12周末斷頭處死，留取血清及肝組織進(jìn)行以下項(xiàng)目測(cè)定：硫代巴比妥酸比色法測(cè)定丙

3、二醛(MDA)含量；黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)活性；ELISA法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)；放射免疫法測(cè)定6-K-PGFlα和TXB2。肝組織用于快速冰凍切片，行SudanⅣ染色，觀察肝細(xì)胞脂變情況；另以10％甲醛固定，常規(guī)包埋、切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色及天狼猩紅染色，觀察肝組織的炎癥、脂肪變性及纖維化程度等。用免疫組織化學(xué)染色及RT-PCR技術(shù)分別檢測(cè)肝臟COX-2蛋白及COX-2mRNA的表達(dá)水

4、平。 結(jié)論： 1.采用逐漸增加乙醇濃度給大鼠灌胃的方法成功復(fù)制了ALD大鼠模型，其病理變化反應(yīng)了臨床酒精性肝病(例如：脂肪堆積、炎癥、纖維化)。 2.乙醇及其代謝產(chǎn)物破壞肝臟脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)，激活氧化應(yīng)激，導(dǎo)致過(guò)氧化產(chǎn)物MDA增多，抗氧化產(chǎn)物SOD減少，促進(jìn)細(xì)胞因子釋放。氧化應(yīng)激參與了ALD的發(fā)病。 3.COX-2參與了ALD大鼠的肝損傷，高表達(dá)的COX-2促進(jìn)了前炎性介質(zhì)PGI2，TXA2等的生成增加。