選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑防治造血干細(xì)胞移植預(yù)處理誘發(fā)口腔黏膜炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)擬在已建立的CTOM大鼠模型上檢測COX-2的表達(dá)水平，并觀察選擇性COX-2抑制劑對OM的防治作用。 研究目的：探討選擇性COX-2抑制劑對CTOM的防治作用。 研究方法： 1.COX-2在CTOM過程中的表達(dá)56只雄性SD大鼠隨機(jī)抽取40只作為模型組，按本課題組前期所建立的造模方案復(fù)制CTOM動(dòng)物模型。其余16只作正常對照組。每日記錄體重和口腔黏膜炎指數(shù)(oralmucositisscore，OMs)。

2、在用藥完成后12hr(即實(shí)驗(yàn)開始的第3d)、36hr(即實(shí)驗(yàn)開始的第4d)、第6d、7d、9d、10d、12d、14d分別處死模型組大鼠6只，對照組大鼠2只。隨機(jī)抽取部分大鼠胸骨骨髓和外周血作骨髓涂片和白細(xì)胞計(jì)數(shù)檢查骨髓抑制情況。取頰、舌部黏膜組織，部分用于病理學(xué)檢查和COX-2免疫組化染色，并按已報(bào)道的方法計(jì)算陽性細(xì)胞染色程度和百分率；部分用于COX蛋白活性檢測。 2.選擇性COX-2抑制劑塞來昔布對CTOM防治作用研究55只

3、雄性SD大鼠隨機(jī)分為：疾病預(yù)防組15只；疾病對照組15只；疾病治療組15只；正常對照組10只。疾病預(yù)防組在造模前4d開始每日灌胃給予選擇性COX-2抑制劑塞來昔布10mg/kg/d，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。疾病治療組接受化療用藥后，于實(shí)驗(yàn)第4d開始，每日灌胃給予相同劑量塞來昔布，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。疾病對照組用于復(fù)制CTOM模型。正常對照組不予處理，常規(guī)飼養(yǎng)。每日記錄動(dòng)物體重、OMS，統(tǒng)計(jì)各組生存曲線、累積生存概率和中位生存天數(shù)；按不同時(shí)點(diǎn)處死動(dòng)物取材，作

4、組織病理學(xué)檢查和免疫組化染色。 研究結(jié)果： 1.COX-2在CTOM過程中的表達(dá)模型組動(dòng)物生存狀況、生存率(80％)、體重、OMS、骨髓象、白血病計(jì)數(shù)等變化的總體情況與本課題組前期結(jié)果基本相同。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)觀察到5只大鼠的OM病損出現(xiàn)在未經(jīng)搔刮的舌背和舌尖部，而且黏膜多個(gè)部位上皮松解，易撕裂出血，尤其是門齒周圍和頰部。病理檢查見潰瘍區(qū)上皮黏膜完整性破壞，棘細(xì)胞層崩解，剩余上皮全層變薄，舌部絲狀乳頭不明顯。潰瘍底部肌

5、層見灶性壞死，黏膜下層血管擴(kuò)張，點(diǎn)狀出血；炎癥細(xì)胞在病損區(qū)散在分布。模型組標(biāo)本在各時(shí)點(diǎn)均有不同程度的COX-2陽性染色，分?jǐn)?shù)最小值為3.00±0.82(12hr)，最高分5.33±1.15(6d)；各時(shí)點(diǎn)間分?jǐn)?shù)值無顯著性差異(P＞0.05)。COX-2陽性細(xì)胞廣泛分布于上皮和上皮下組織。在頰部潰瘍組織中，上皮細(xì)胞染色不明顯；在舌部自發(fā)潰瘍標(biāo)本中舌背和舌腹黏膜上皮棘層細(xì)胞呈帶狀強(qiáng)陽性染色。在上皮下血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和肌纖維均可見CO

6、X-2陽性染色；壞死灶和較大血管周圍還可見COX-2陽性細(xì)胞環(huán)繞。正常黏膜上皮和上皮下組織中未見COX-2陽性表達(dá)。COX-2蛋白活性在各時(shí)點(diǎn)內(nèi)均可檢出。第4d、6d、10d的COX-2活性分別占總COX活性的36.87％、76.45％、和55.06％。COX-1在各時(shí)點(diǎn)內(nèi)及正常黏膜組織中均可檢測出不同程度的表達(dá)。 2.選擇性COX-2抑制劑塞來昔布對CTOM防治作用研究疾病預(yù)防組和疾病治療組生存率顯著低于疾病對照組和正常對照組

7、(P=0.000)。疾病預(yù)防組大鼠最長生存時(shí)間僅為8d，8d累積生存概率18.75％，中位生存時(shí)間為6.83d。疾病治療組大鼠最長生存時(shí)間10d，8d累積生存概率為40.11％，中位生存時(shí)間為8.79d。疾病對照組和正常對照組間生存曲線無顯著性差異(P=0.052)；疾病預(yù)防組和疾病治療組、疾病對照組及正常對照組；疾病治療組與疾病對照組及正常對照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。疾病預(yù)防組大鼠的OM發(fā)生率93.33％(14/15)，且病損一開始便達(dá)

8、到2～3級(jí)，隨后病程發(fā)展迅速，到第7d累計(jì)有3只大鼠發(fā)生5級(jí)OM。疾病治療組大鼠的OM發(fā)生率為80.00％(12/15)，第4dOM發(fā)生率為66.67％(10/15)。有2只大鼠的OM在第6d緩解，未發(fā)展成潰瘍；其余的病損均未觀察到明顯愈合跡象，累計(jì)有4只大鼠的病損發(fā)展至4級(jí)(第8d)。各組的OM發(fā)生情況不相等，OM嚴(yán)重程度依次為：疾病預(yù)防組＞疾病治療組＞疾病對照組＞正常對照組。從第5d開始，各組的體重差異顯著(P＜0.05)。4組CO

9、X-2免疫組化染色分值差異顯著(P=0.000)。染色程度順序依次為疾病對照組＞疾病治療組＞疾病預(yù)防組＞正常對照組。免疫組化染色顯示疾病預(yù)防組和疾病治療組局部黏膜上皮細(xì)胞可見少量不同程度的COX-2陽性表達(dá)，染色程度適中到弱染；黏膜下僅見少量肌纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞弱染；血管內(nèi)皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均未見陽性染色。各組OMs與免疫組化得分間無顯著相關(guān)性。 研究結(jié)論： 1.CTOM大鼠模型口腔黏膜組織中COX-2表達(dá)上調(diào)，但與O