反義核酸逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞多藥耐藥的研究.pdf

1、腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性(multidrug resistance,MDR)的產(chǎn)生是腫瘤化療中經(jīng)常遇到的現(xiàn)象,也是導(dǎo)致化療失敗的一個(gè)主要原因.P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介導(dǎo)的MDR在腫瘤MDR機(jī)制中處于主導(dǎo)地位.p-gp是一種ATP依賴性轉(zhuǎn)運(yùn)排出泵,通過(guò)ATP提供能量將已進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的藥物從細(xì)胞內(nèi)泵出細(xì)胞外,使腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低.目前,通過(guò)特異性抑制mdr 1基因轉(zhuǎn)錄,最終達(dá)到抑制p-gp合成、逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR是該研

2、究領(lǐng)域的熱點(diǎn).該研究主要使用反義寡核苷酸和反義核酶兩種反義技術(shù)探討在體外細(xì)胞水平反義基因治療逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的效果.該研究國(guó)內(nèi)首次使用RNA結(jié)構(gòu)分析程序進(jìn)行核酶切割靶點(diǎn)選擇,構(gòu)建核酶表達(dá)質(zhì)粒并觀察其對(duì)腫瘤MDR的穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)效果.結(jié)論:1 封閉mdr-1啟動(dòng)子的主要轉(zhuǎn)錄起始部位和啟動(dòng)子上游的CAAT盒子可降低腫瘤細(xì)胞mdr-1 mRNA和P-gp含量,抑制其轉(zhuǎn)運(yùn)功能.負(fù)向調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的這些轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)部位可通過(guò)抑制mdr-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)其

3、MDR.封閉mdr-1啟動(dòng)子的次要轉(zhuǎn)錄起始部位和上游的GC盒子則無(wú)明顯作用.2 轉(zhuǎn)染mdr-1的ASODN逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞MDR的最佳作用位點(diǎn)是mdr-1 mRNA起始密碼區(qū)域.3 5μmol/L的ASODN已可較好地逆轉(zhuǎn)MDR,在轉(zhuǎn)染ASODN后第2天出現(xiàn)最大逆轉(zhuǎn)效果.高濃度組(20μmol/L)與低濃度組(5μmol/L)逆轉(zhuǎn)MDR的效果相似,但逆轉(zhuǎn)效果的持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng).4 核酶對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDR的逆轉(zhuǎn)效果與篩選出的最佳ASODN片段相