脈沖磁場對乳腺癌細(xì)胞MCF-7-ADR多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)效果及分子機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)資料統(tǒng)計(jì)，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7％—10％，在婦女僅次于子宮癌。它的發(fā)病常與遺傳有關(guān)，以及40-60歲之間，絕經(jīng)期前后的婦女發(fā)病率較高。一般來說，早期乳腺癌癌腫較小，未發(fā)生擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，通過手術(shù)切除或放射治療的患者5年內(nèi)生存率可達(dá)60％以上；但對于中晚期患者通常無法進(jìn)行手術(shù)切除，臨床上主要采用放化療、中醫(yī)藥治療及一些生物療法，但隨著化療時間的延長，腫瘤細(xì)胞對化療藥物的多藥耐藥性(multidrug

2、resisitance，MDR)成為治療的最大障礙之一。MDR的發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，迄今為止尚無逆轉(zhuǎn)策略能完全克服MDR。迄今為止發(fā)現(xiàn)一些與腫瘤耐藥相關(guān)的蛋白，如P—糖蛋白(P—gp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP1)和乳腺癌抗性蛋白(BCRP)，他們的高表達(dá)與乳腺癌化療敏感性有密切關(guān)系。 自從Tsuruo[1]等首次報(bào)道維拉帕米(verapamil)能逆轉(zhuǎn)P—388NCR細(xì)胞對長春新堿的耐藥性以來，對腫瘤細(xì)胞的MDR現(xiàn)像研究進(jìn)展非常迅速

3、。但是化學(xué)逆轉(zhuǎn)藥物存在明顯的毒副作用，患者耐受性較差。近年來也有大量生物制品或天然中藥用于腫瘤細(xì)胞的MDR逆轉(zhuǎn)，但是療效不甚確切，應(yīng)用于臨床的更是寥寥無幾。 脈沖磁場(pulsed magnetic fields，PMF)作為一種物理方法逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR，初步研究顯示具有一定潛力。本文以乳腺癌細(xì)胞系MCF—7為研究對象，研究脈沖磁場對多藥耐藥腫瘤細(xì)胞MCF—7/ADR的MDR逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制。 本論文包括兩個實(shí)驗(yàn)部分：

4、 1、脈沖磁場對乳腺癌細(xì)胞MCF—7/ADR多藥耐藥逆轉(zhuǎn)的效應(yīng)研究。 2、脈沖磁場逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞MCF—7/ADR多藥耐藥機(jī)理研究。 目的：研究脈沖磁場(Pulsed Magnetic Fields，PMF)對乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF—7/ADR的逆轉(zhuǎn)作用。 方法：采用MTT實(shí)驗(yàn)方法，分別檢測不同頻率及不同磁場強(qiáng)度條件照射下的MCF—7/ADR細(xì)胞的耐藥倍數(shù)和逆轉(zhuǎn)倍數(shù)。用流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)脈沖磁場照射后MCF—7/

5、ADR細(xì)胞中Rh123藥物蓄積量變化。用流式免疫熒光技術(shù)檢測膜經(jīng)脈沖磁場照射后MCF—7/ADR細(xì)胞膜表面P—糖蛋白(P—gp)和多藥耐藥相關(guān)蛋白(mrp1)表達(dá)情況。采用半定量RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng))檢測經(jīng)脈沖磁場照射后MCF—7/ADR細(xì)胞中MDR1和MRP1基因表達(dá)情況。建立人乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF—7/ADR裸鼠移植瘤模型，通過測量腫瘤體積及重量觀察PMF對腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)逆轉(zhuǎn)作用。 結(jié)果：脈沖磁場能有效逆轉(zhuǎn)乳

6、腺癌耐藥細(xì)胞株MCF—7/ADR對阿霉素產(chǎn)生的耐藥性(p<0.01)，其中110Hz，40mT照射條件逆轉(zhuǎn)效果最好，可達(dá)5倍左右；脈沖磁場能提高羅丹明123在細(xì)胞內(nèi)的蓄積量，其中110Hz，40mT照射條件下可有效提升20％左右藥物蓄積量；細(xì)胞經(jīng)脈沖磁場照射后，膜表面耐藥蛋白P糖蛋白表達(dá)量明顯下降，MRP1蛋白表達(dá)量變化不明顯；編碼上述兩種耐藥蛋白的耐藥基因表達(dá)量均明顯下降；此外，脈沖磁場聯(lián)合阿霉素可有效逆轉(zhuǎn)裸鼠移植瘤的生長增值(p<0