結(jié)腸癌細(xì)胞VCR耐藥株的建立及相關(guān)miRNA篩選.pdf

1、背景：腫瘤細(xì)胞耐藥是導(dǎo)致腫瘤化學(xué)治療失敗的重要原因，長(zhǎng)春新堿(vincristine，VCR)是一類(lèi)廣泛用于腫瘤治療的化學(xué)藥物。但是，長(zhǎng)期使用可使腫瘤細(xì)胞對(duì)VCR產(chǎn)生耐藥性，腫瘤耐藥機(jī)制仍不清楚。本研究探討與結(jié)腸癌耐藥的微小RNA(microRNA，miRNA)，旨在揭示腫瘤耐藥機(jī)制及為腫瘤細(xì)胞耐藥逆轉(zhuǎn)提供基礎(chǔ)。
　　目的：建立長(zhǎng)春新堿耐藥結(jié)腸癌細(xì)胞模型，篩選與結(jié)腸癌細(xì)胞VCR耐藥相關(guān)的miRNA。
　　方法：
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2、.培養(yǎng)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞，采用VCR梯度誘導(dǎo)，建立HCT-8/VCR耐藥細(xì)胞株。
　　2.采用全基因組篩選的研究策略，運(yùn)用HiSeq2500測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)的方法，檢測(cè)和分析耐藥HCT-8/VCR細(xì)胞的和非耐藥的HCT-8細(xì)胞差異性表達(dá)的miRNAs，構(gòu)建其miRNA的差異表達(dá)譜。
　　3.針對(duì)鑒定的差異miRNA，通過(guò)靶基因預(yù)測(cè)軟件進(jìn)行靶位點(diǎn)確認(rèn)，通過(guò)靶基因所在基因的GO進(jìn)行功能注釋。
　　結(jié)果：
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3、.利用濃度梯度的VCR建立了VCR耐藥的結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8/VCR，HCT-g/VCR細(xì)胞在2×103ng/mLVCR中生長(zhǎng)良好。
　　2.共進(jìn)行了1651種miRNA測(cè)序，其中有差異的有48種miRNA，與非耐藥的結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞相比，24種miRNA差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），其中有17種miRNA表達(dá)上調(diào)(P＜0.05）。hsa-miR-675-3p表達(dá)量上調(diào)最高，高達(dá)7.497681倍，其次是hsa-miR-

4、100-3p, hsa-miR-125b-1-3p, hsa-miR-582-5p, hsa-miR-3141, chr15_10055,hsa-miR-582-5p，hsa-miR-582-3p，hsa-miR-3687。7種miRNA表達(dá)下調(diào)(P＜0.05），下調(diào)最高的是hsa-miR-146a-5p，下調(diào)7.75199倍，其次是hsa-miR-1247-3p，hsa-miR-181a-3p，hsa-miR-1247-5p。