結腸癌細胞中CacyBP-SIP入核后下游靶蛋白的篩選.pdf

1、目的:結腸癌（colorectal cancer，CRC）發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，但目前對結腸癌的發(fā)病機制仍不清楚。鈣周期素結合蛋白（Calcyclin-binding protein，CacyBP/SIP）主要表達于細胞質中，本課題組前期研究發(fā)現，胃泌素可刺激結腸癌細胞SW480中CacyBP/SIP發(fā)生核轉位，且促進細胞增殖。本研究為進一步篩選CacyBP/SIP入核后下游相互作用的靶蛋白，探索 CacyBP/SIP入核后下游結合分

2、子的信號通路，探究其在結腸癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用。
　　方法:采用胃泌素刺激人結腸癌SW480細胞胞質中的CacyBP/SIP進入細胞核，構建CacyBP/SIP核轉位細胞模型，用激光共聚焦掃描顯微鏡術和蛋白免疫印跡(Western Blot)驗證細胞模型成功建立。培養(yǎng)未給予胃泌素刺激的結腸癌SW480細胞為未刺激組，提取造模組與未刺激組核蛋白，采用iTRAQ技術結合LC-MS/MS，篩選兩組差異蛋白，行Mascot數據庫檢索，G

3、o在線對差異蛋白進行功能注釋聚類分析，并運用KEGG對蛋白富集的信號通路進行分析。
　　結果：1.胃泌素刺激人結腸癌SW480細胞中CacyBP/SIP入核，構造CacyBP/SIP入核功能的細胞模型，蛋白免疫印跡驗證 CacyBP/SIP入核功能的細胞模型成功建立。2. iTRAQ技術篩選出差異蛋白2136個，其中表達上調的有173個，表達下調的有132個。3.生物信息學分析表明，生物學過程的差異表達蛋白主要集中在生物合成過程（

4、biosynthetic process）、細胞過程(cellular process)，分子功能分類中，差異表達蛋白主要富集于結合功能（binding）、催化功能（catalyti cactivity）。細胞成分(cellular_component)的蛋白主要集中于 organelle上。篩選具有結合功能、定位于細胞核且差異倍數大于1.5的蛋白，共7個，分別為PML、VDAC2、AnnexinA1、UBE2、Filamin-A，He

5、at shock protein beta-1、Cathepsin B。Pathway代謝通路注釋篩選出67條通路，其中具有顯著性的通路共6條，4條通路有關鍵蛋白表達，分別是：Calcium signaling pathway、Ubiquitin mediated proteolysis、VEGF signaling pathway、MAPK signaling pathway.
　　結論：iTRAQ篩選出CacyBP/SIP入核