結(jié)腸癌細(xì)胞中CacyBP-SIP核轉(zhuǎn)位后其下游信號(hào)分子的篩選.pdf

1、目的：在結(jié)腸癌中，鈣周期素結(jié)合蛋白（CacyBP/SIP）的入核可以促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展，在人結(jié)腸癌 SW480細(xì)胞中，篩選出 CacyBP/SIP核轉(zhuǎn)位后與其相互作用的蛋白質(zhì)。
　　方法：構(gòu)建 pGC-FU-CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒載體并且包裝慢病毒上清，之后用病毒上清感染人 SW480細(xì)胞，Western blotting方法用來檢測(cè)感染病毒后SW480細(xì)

2、胞中融合蛋白CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences和內(nèi)源性 CacyBP/SIP的蛋白表達(dá)情況。串聯(lián)親和層析法和免疫沉淀法被用來純化與靶蛋白 CacyBP/SIP相互作用的下游蛋白復(fù)合物，之后行質(zhì)譜分析蛋白復(fù)合物的具體組成成分并分析數(shù)據(jù)結(jié)果。
　　結(jié)果：CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒包裝成功，病毒滴度為2×108

3、TU/mL。Western blotting方法從蛋白水平上證實(shí)了融合蛋白 CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences在人 SW480細(xì)胞的細(xì)胞核中的正確表達(dá)。串聯(lián)親和層析方法并未篩選與 CacyBP/SIP相互作用的下游信號(hào)分子，但是從免疫沉淀法篩選的蛋白復(fù)合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析：肌動(dòng)蛋白可能是與 CacyBP/SIP相互作用的一個(gè)有意義蛋白分子。
　　結(jié)論：
　　1.成功包裝 C