阿托伐他汀逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞多藥耐藥及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過體外實(shí)驗(yàn)研究阿托伐他汀對(duì)人結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞HCT116/L-OHP耐藥性的影響，并進(jìn)一步探討阿托伐他汀逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞 HCT116/L-OHP耐藥性的機(jī)制。
　　方法：CCK-8法確定阿托伐他?。ˋtorvastatin，ATV）對(duì)結(jié)腸癌敏感細(xì)胞株HCT116、耐藥細(xì)胞株HCT116/L-OHP細(xì)胞的殺傷作用及ATV對(duì)HCT116/L-OHP細(xì)胞的無毒劑量； CCK-8法測(cè)定奧沙利鉑（Oxaliplatin，L-OHP

2、）對(duì) HCT116及HCT116/L-OHP的毒性作用，計(jì)算出耐藥指數(shù)；以無細(xì)胞毒性的ATV作為耐藥逆轉(zhuǎn)劑，聯(lián)合奧沙利鉑觀察其對(duì)耐藥細(xì)胞株HCT116/L-OHP的逆轉(zhuǎn)耐藥作用，計(jì)算得逆轉(zhuǎn)倍數(shù)；qRT-PCR檢測(cè)ATV作用結(jié)腸癌HCT116/L-OHP細(xì)胞48 h后LRP1、MRP1、P-gp、BRCP mRNA的表達(dá)變化；AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)單用奧沙利鉑及阿托伐他汀聯(lián)合奧沙利鉑作用結(jié)腸癌HCT116/L-OHP細(xì)

3、胞48 h對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；Western blot方法檢測(cè)單用奧沙利鉑組及奧沙利鉑聯(lián)合ATV處理結(jié)腸癌HCT116/L-OHP細(xì)胞48 h后bax、bcl-2、caspase-3蛋白的表達(dá)水平，檢測(cè) ATV作用結(jié)腸癌 HCT116/L-OHP細(xì)胞48 h后 Stat3、p-Stat3、NF-κB及NF-κB/p65蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：阿托伐他汀對(duì)結(jié)腸癌敏感細(xì)胞株 HCT116、耐藥細(xì)胞株 HCT116/L-OHP細(xì)胞的殺傷

4、作用且呈濃度-時(shí)間依賴性，阿托伐他汀對(duì)結(jié)腸癌HCT116/L-OHP細(xì)胞的無毒劑量為20μmol/L；Oxaliplatin對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116和HCT116/L-OHP的細(xì)胞毒性作用呈濃度依賴性，且對(duì)敏感株和耐藥株的殺傷作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），奧沙利鉑對(duì)HCT116和HCT116/L-OHP的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為218.197㎎/L和1398.773㎎/L，耐藥指數(shù)為6.41倍；ATV能夠增加奧沙利鉑對(duì)HC

5、T116/L-OHP的細(xì)胞毒作用，與單用oxaliplatin相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，以無毒劑量ATV聯(lián)合奧沙利鉑作用于HCT116/L-OHP48h后，耐藥細(xì)胞株的IC50降至399.204㎎/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為3.5倍；qRT-PCR檢測(cè)顯示ATV作用結(jié)腸癌HCT116/L-OHP細(xì)胞48 h后BCRP、LRP1的表達(dá)下降，而P-gp、MRP1表達(dá)未見明顯改變；Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)照組

6、、單用ATV組、單用奧沙利鉑組及阿托伐他汀聯(lián)合奧沙利鉑組對(duì)HCT116/L-OHP細(xì)胞作用48h其細(xì)胞凋亡率分別為（0.58±0.14）％、（0.95±0.15）%、（6.47±0.71）%、（12.26±0.74）%，單用 ATV組與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而單用奧沙利鉑組及奧沙利鉑聯(lián)合ATV組與對(duì)照組相比和奧沙利鉑聯(lián)合ATV前后相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Western blot檢測(cè)顯示在結(jié)腸癌HC

7、T116/L-OHP細(xì)胞中ATV聯(lián)合L-OHP處理48 h較單用L-OHP上調(diào)bax、caspase-3表達(dá)，下調(diào)bcl-2表達(dá)；ATV作用HCT116/L-OHP細(xì)胞48 h后p-Stat3、NF-κB/p65表達(dá)下降，而Stat3、NF-κB表達(dá)未見明顯改變。
　　結(jié)論：阿托伐他汀對(duì)結(jié)腸癌 HCT116、HCT116/L-OHP細(xì)胞的殺傷作用且呈濃度-時(shí)間依賴性，阿托伐他汀對(duì)結(jié)腸癌 HCT116/L-OHP細(xì)胞的無毒劑量為20

8、μmol/L；研究顯示20μmol/L ATV可以逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌HCT116/L-OHP細(xì)胞耐藥，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為3.5；20μmol/L ATV逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌耐藥，機(jī)制與耐藥相關(guān)基因LRP1、BCRP的表達(dá)下降有關(guān)，與P-gp、MRP1無明顯關(guān)系；20μmol/L ATV協(xié)同L-OHP增加HCT116/L-OHP細(xì)胞凋亡；L-OHP聯(lián)合20μmol/L ATV較單用L-OHP上調(diào)caspase-3、Bax的表達(dá)，下調(diào) Bcl-2的表達(dá)；20μmo