阿托伐他汀逆轉結腸癌細胞多藥耐藥及其機制研究.pdf

1、目的：通過體外實驗研究阿托伐他汀對人結腸癌耐藥細胞HCT116/L-OHP耐藥性的影響，并進一步探討阿托伐他汀逆轉結腸癌耐藥細胞 HCT116/L-OHP耐藥性的機制。
　　方法：CCK-8法確定阿托伐他汀（Atorvastatin，ATV）對結腸癌敏感細胞株HCT116、耐藥細胞株HCT116/L-OHP細胞的殺傷作用及ATV對HCT116/L-OHP細胞的無毒劑量； CCK-8法測定奧沙利鉑（Oxaliplatin，L-OHP

2、）對 HCT116及HCT116/L-OHP的毒性作用，計算出耐藥指數；以無細胞毒性的ATV作為耐藥逆轉劑，聯合奧沙利鉑觀察其對耐藥細胞株HCT116/L-OHP的逆轉耐藥作用，計算得逆轉倍數；qRT-PCR檢測ATV作用結腸癌HCT116/L-OHP細胞48 h后LRP1、MRP1、P-gp、BRCP mRNA的表達變化；AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測單用奧沙利鉑及阿托伐他汀聯合奧沙利鉑作用結腸癌HCT116/L-OHP細

3、胞48 h對細胞凋亡的影響；Western blot方法檢測單用奧沙利鉑組及奧沙利鉑聯合ATV處理結腸癌HCT116/L-OHP細胞48 h后bax、bcl-2、caspase-3蛋白的表達水平，檢測 ATV作用結腸癌 HCT116/L-OHP細胞48 h后 Stat3、p-Stat3、NF-κB及NF-κB/p65蛋白表達水平。
　　結果：阿托伐他汀對結腸癌敏感細胞株 HCT116、耐藥細胞株 HCT116/L-OHP細胞的殺傷

4、作用且呈濃度-時間依賴性，阿托伐他汀對結腸癌HCT116/L-OHP細胞的無毒劑量為20μmol/L；Oxaliplatin對結腸癌細胞HCT116和HCT116/L-OHP的細胞毒性作用呈濃度依賴性，且對敏感株和耐藥株的殺傷作用差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），奧沙利鉑對HCT116和HCT116/L-OHP的半數抑制濃度（IC50）分別為218.197㎎/L和1398.773㎎/L，耐藥指數為6.41倍；ATV能夠增加奧沙利鉑對HC

5、T116/L-OHP的細胞毒作用，與單用oxaliplatin相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，以無毒劑量ATV聯合奧沙利鉑作用于HCT116/L-OHP48h后，耐藥細胞株的IC50降至399.204㎎/L，逆轉倍數為3.5倍；qRT-PCR檢測顯示ATV作用結腸癌HCT116/L-OHP細胞48 h后BCRP、LRP1的表達下降，而P-gp、MRP1表達未見明顯改變；Annexin V-FITC/PI雙染法檢測結果顯示，對照組

6、、單用ATV組、單用奧沙利鉑組及阿托伐他汀聯合奧沙利鉑組對HCT116/L-OHP細胞作用48h其細胞凋亡率分別為（0.58±0.14）％、（0.95±0.15）%、（6.47±0.71）%、（12.26±0.74）%，單用 ATV組與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而單用奧沙利鉑組及奧沙利鉑聯合ATV組與對照組相比和奧沙利鉑聯合ATV前后相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；Western blot檢測顯示在結腸癌HC

7、T116/L-OHP細胞中ATV聯合L-OHP處理48 h較單用L-OHP上調bax、caspase-3表達，下調bcl-2表達；ATV作用HCT116/L-OHP細胞48 h后p-Stat3、NF-κB/p65表達下降，而Stat3、NF-κB表達未見明顯改變。
　　結論：阿托伐他汀對結腸癌 HCT116、HCT116/L-OHP細胞的殺傷作用且呈濃度-時間依賴性，阿托伐他汀對結腸癌 HCT116/L-OHP細胞的無毒劑量為20

8、μmol/L；研究顯示20μmol/L ATV可以逆轉結腸癌HCT116/L-OHP細胞耐藥，其逆轉倍數為3.5；20μmol/L ATV逆轉結腸癌耐藥，機制與耐藥相關基因LRP1、BCRP的表達下降有關，與P-gp、MRP1無明顯關系；20μmol/L ATV協(xié)同L-OHP增加HCT116/L-OHP細胞凋亡；L-OHP聯合20μmol/L ATV較單用L-OHP上調caspase-3、Bax的表達，下調 Bcl-2的表達；20μmo