熒光標記磁靶向載藥體系的制備與表征.pdf

1、磁靶向載藥體系在腫瘤治療領(lǐng)域擁有廣闊的應用前景，其使用價值取決于是否具備優(yōu)秀的超順磁性、良好的生物相容性以及有效的藥物活性等。所以，在近些年來制備功能不同的磁靶向載藥體系已經(jīng)成為了新的研究熱點。希望能實現(xiàn)其優(yōu)秀的磁響應性，且給予其較好的生物相容性，藥物活性以及靶向示蹤等性質(zhì)。本論文在這一研究背景之下，從制備超順磁性納米磁核開始，將實驗工作分為三個階段。第一階段（第二章、第三章）的目標是探索出一種新的磁靶向微球制備方法，并對其進行表征;第

2、二階段（第四章、第五章）的目標是在繼承上一階段成果的基礎(chǔ)上，分別探索對磁靶向微球進行熒光化修飾和藥物負載的方法，然后分別進行表征;第三階段（第六章）的目標是在繼承前兩階段經(jīng)驗成果的基礎(chǔ)上，同時對磁靶向微球進行熒光化修飾與藥物負載，得到了熒光標記磁靶向載藥微球，并對所制備的微球進行表征。具體研究結(jié)果如以下幾個方面所示:
　　 (1)第一階段:
　　 使用水熱共沉淀和油相熱分解這兩種方法，分別制備出了兩種四氧化三鐵(Fe3O

3、4)納米顆粒，并對其進行了相應的材料表征，測試了兩種納米材料的磁性能、熱重分析、顆粒形貌等，并研究比較了兩種四氧化三鐵納米顆粒的異同，然后選擇水熱共沉淀法作為后續(xù)制備磁性納米材料的制備方法。
　　 采用超聲乳液反應法制備了納米磁性蛋白微球。著重探討不同反應條件對于制備過程的影響，并通過大量實驗得出最優(yōu)化的實驗制備條件。另外還對于超聲乳液反應法的反應原理進行了探討。研究了超聲空化效應在乳液體系中的作用，闡述了牛血清蛋白分子結(jié)合成微

4、球殼層的機理。
　　 (2)第二階段:
　　 利用超聲乳液反應法制備了熒光標記磁性納米微球。先后使用了兩種方法探討在制備過程中引入熒光功能基團的途徑。第一種方法是在超聲反應聚合前，對牛血清蛋白進行熒光修飾。第二種方法是在超聲反應聚合后，利用微球殼層中牛血清蛋白的-NH2作為反應位點，對已成型的納米微球進行表面熒光修飾。實驗結(jié)果證明，在超聲聚合前進行熒光修飾，有可能會影響到蛋白質(zhì)殼層的形成。而在超聲聚合后對微球表面進行熒光

5、修飾則可以避免這一情況的出現(xiàn)。通過對其進行材料表征發(fā)現(xiàn)，微球在磁響應性與結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性等方面均沒有受到熒光修飾過程的影響。而對其進行熒光光譜分析后發(fā)現(xiàn)，微球的熒光強度與樣品的濃度呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)性。
　　 將超聲乳液反應法與超細化粉碎技術(shù)相結(jié)合，制備出了磁性四環(huán)素載藥微球。使用超細化技術(shù)將四環(huán)素粉末的平均粒徑降至1μm左右，改善了四環(huán)素藥物顆粒在乳液反應體系中的大小以及分布情況，使其能更好的溶解分散在微乳液滴中，從而得到磁性四環(huán)素載

6、藥微球。通過進行透射電鏡、振動樣品磁強計和細菌抑制實驗等測試，可以發(fā)現(xiàn)微球自身的結(jié)構(gòu)并沒有因為包覆藥物而被破壞。在抑菌實驗中，磁性四環(huán)素載藥微球展現(xiàn)了十分明顯的藥物活性。這些說明由超聲乳液反應法所制備的磁性納米微球可以用于負載治療藥物，并在磁場的引導下，使其進行靶向運輸。
　　 (3)第三階段:
　　 結(jié)合制備熒光標記磁性納米微球與磁性四環(huán)素載藥微球的經(jīng)驗，制備出熒光標記磁性抗癌載藥微球。為了使超聲乳液反應方法具有更廣泛

7、的藥物適用性，選用了親水性較強的氟尿嘧啶作為包覆對象。使用濕式球磨法，加入了硬脂酸作為改性劑。最后制得了粒徑合適而且具有一定疏水性的氟尿嘧啶復合微納米粒子。當藥物負載完成后，使用異硫氰酸羅丹明B對載藥微球進行表面熒光修飾，從而得到熒光標記磁性抗癌載藥微球。通過振動樣品磁強計與熒光光譜分析發(fā)現(xiàn)，熒光標記磁性抗癌載藥微球依然具有良好的超順磁性和熒光發(fā)光性，利用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法（MTT法）檢驗發(fā)現(xiàn)，熒光標記磁性抗癌載藥微球?qū)τ谛?/p>

8、鼠癌細胞有明顯的殺傷作用。
　　 綜上所述，本論文從制備磁性四氧化三鐵納米磁核開始，利用超聲乳液反應的方法，結(jié)合超細化粉碎改性技術(shù)，先后制備完成了納米磁性蛋白微球、熒光標記磁性納米微球、磁性四環(huán)素載藥微球、熒光標記磁性抗癌載藥微球。探索了在制備納米磁靶向載藥體系的一系列問題與解決方案，制備出飽和磁化強度35emu/g以上，微球粒徑300nm以下，具有能與熒光等功能基團反應的活性位點，并擁有藥物活性的納米磁靶向載藥體系。這為納米磁