熒光標(biāo)記VEGF127-133靶向VEGFR-2實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究以腫瘤細(xì)胞上VEGFR-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2)為靶點(diǎn)，以能與其特異性結(jié)合的 VEGF127-133氨基酸短肽配體為靶向分子，并以熒光素作為成像部分，構(gòu)建熒光標(biāo)記 VEGF127-133的新型靶向分子探針，并探討該靶向分子探針在體外對腫瘤細(xì)胞靶向性能，為進(jìn)一步活體內(nèi)靶向成像奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：（1）.細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測HepG2與HUVEC

2、細(xì)胞VEGFR-2表達(dá)情況。分為實(shí)驗(yàn)組、對照組和空白組。實(shí)驗(yàn)組爬片上加抗VEGFR-2的一抗和熒光標(biāo)記二抗；對照組加等量的熒光二抗；空白組上加等量的PBS。觀察各組爬片上細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。
　　(2). Western-blot定量檢測HepG2與HUVEC細(xì)胞VEGFR-2蛋白表達(dá)情況。
　　(3).對比劑偶聯(lián)。合成熒光標(biāo)記的VEGF127-133和隨機(jī)小肽，并進(jìn)行相關(guān)理化數(shù)據(jù)測試。
　　(4).細(xì)胞熒光實(shí)驗(yàn)檢測熒光標(biāo)

3、記VEGF127-133體外對HepG2與HUVEC細(xì)胞靶向性及特異性。實(shí)驗(yàn)分兩批進(jìn)行。第一批實(shí)驗(yàn)組（HepG2與HUVEC細(xì)胞爬片）加入FITC標(biāo)記VEGF127-133，對照組加入FITC標(biāo)記的隨機(jī)序列小肽。觀察爬片上細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。第二批實(shí)驗(yàn)組（HepG2細(xì)胞爬片）與對照組（正常肝細(xì)胞爬片）加入等量的FITC標(biāo)記VEGF127-133，觀察爬片上細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。
　　(5).小動物活體成像掃描初步檢測熒光標(biāo)記VEGF127-

4、133對HepG2肝癌荷瘤鼠的靶向性能。經(jīng)小鼠尾靜脈實(shí)驗(yàn)組注入Cy5.5標(biāo)記VEGF127-133，對照組注入Cy5.5標(biāo)記的隨機(jī)序列小肽，觀察熒光在小鼠體內(nèi)分布情況。
　　結(jié)果:(1).實(shí)驗(yàn)組HUVEC及HepG2細(xì)胞膜及胞質(zhì)內(nèi)均有VEGFR-2表達(dá)；對照組及空白組爬片上細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)均沒有VEGFR-2陽性表達(dá)。
　　(2). Western-blot檢測HUVEC細(xì)胞及HepG2細(xì)胞均有VEGFR-2蛋白的表達(dá)。

5、>　　(3).成功將熒光材料FITC及Cy5.5連接在小肽VEGF127-133和隨機(jī)小肽上。
　　(4).體外靶向性試驗(yàn)：FITC標(biāo)記的靶向小肽對HepG2與HUVEC細(xì)胞具有靶向性及特異性，F(xiàn)ITC標(biāo)記的隨機(jī)序列小肽對HepG2與HUVEC細(xì)胞不具有靶向性。
　　(5).活體試驗(yàn)：Cy5.5標(biāo)記的靶向探針能對腫瘤區(qū)靶向顯影。
　　結(jié)論：以VEGF127-133為靶向運(yùn)載體，F(xiàn)ITC或Cy5.5為顯像劑的新型靶向分子