乳鐵蛋白修飾尼莫地平長循環(huán)納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備及其腦靶向性評價.pdf

1、目的:乳鐵蛋白(Lf)用以修飾尼莫地平長循環(huán)納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(Lf-PEG-NMD-NLC)，對其理化性質(zhì)進行考察，并對 Lf-PEG-NMD-NLC進行體外和體內(nèi)的評價。
　　方法:選擇熔融-超聲法制備NLC并篩選最佳處方。在EDCI/NHS的催化下將NLC連接Lf，對Lf-PEG-NMD-NLC的形態(tài)、粒徑、Zeta電位、包封率、載藥量和體外釋放進行考察，以外觀、色澤、再分散性等為指標(biāo)，優(yōu)選了 Lf-PEG-NMD-NLC的凍

2、干工藝和凍干保護劑。采用透射電鏡(TEM)、馬爾文動態(tài)光散射粒徑儀對納米粒的形態(tài)、粒徑大小及zeta電位進行表征；采用透析法考察體外釋放。紫外分光光度法(UV-vis)，紅外法(FTIR)和核磁共振氫譜(1H NMR)鑒定 Lf-PEG-NLC的合成。硝普鈉(SNP)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞建立腦卒中(stroke)細(xì)胞模型，采用MTT法確定SNP抑制 PC12細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度，熒光顯微鏡下觀察不同時間下 PC12細(xì)胞對mPEG-NMD-

3、NLC、Lf-PEG-NMD-NLC的攝取效果，采用流式計數(shù)法定量分析Lf-PEG-NMD-NLC對硝普鈉誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的保護作用。以DiR染料作為熒光探針用荷瘤小鼠體內(nèi)活體成像技術(shù)測定納米粒在24h后小鼠的腦內(nèi)及離體組織器官熒光強度。
　　結(jié)果:所制得的 Lf-PEG-NMD-NLC粒徑為(169.5±14.15)nm， Zeta電位為(-15.9±0.09)mV，包封率和載藥量分別為(93.77±0.31)％和(1.43±0

4、.02)%、Lf結(jié)合率為26.05±0.99%。選擇300.00μmol·L-1作為硝普鈉損傷 PC12細(xì)胞的有效濃度。Lf-PEG-NMD-NLC組在攝取4 h后熒光強度最為明顯，經(jīng)Lf-PEG-NMD-NLC保護后，與對照組和實驗組相比，PC12細(xì)胞凋亡率為19.57±1.15%?；铙w成像表明，Lf-PEG-DiR-NLC在腦部的熒光強度是DiR溶液和mPEG-DiR-NLC的2.95和1.27倍，腦靶向性最強，表明所制備制劑具有顯

5、著的腦靶向效果。
　　結(jié)論:通過熔融-超聲法，Box-Behnken效應(yīng)面法優(yōu)化處方制備符合藥典要求，具有一定緩釋性能。Lf-PEG-NMD-NLC的粒徑、電位均呈單峰分布，包封率、載藥量較高，穩(wěn)定性較好。體外細(xì)胞實驗表明 Lf-PEG-NMD-NLC對 PC12細(xì)胞的保護作用明顯高NMD-NLC組和mPEG-NMD-NLC組。體內(nèi)試驗表明Lf-PEG-NMD-NLC不僅可以延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間，并具有顯著的長循環(huán)效果和腦靶向