轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾納米鉆石的制備及其靶向腫瘤細(xì)胞生物效應(yīng).pdf

1、目前用于癌癥治療的手段主要有手術(shù)、放療、化療和生物治療等,但各種治療手段都給患者帶來極大的痛苦,而且對(duì)中晚期癌癥病人作用不明顯,因此研究有效且低傷害的靶向治療方法尤為迫切。近年來隨著納米科學(xué)與生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等學(xué)科的有機(jī)結(jié)合,納米生物醫(yī)學(xué)已經(jīng)成為引人矚目的新興交叉學(xué)科之一。其中以納米鉆石為代表的納米粒子,以其具有特殊的生物相容性好、無毒性、尺寸小、光學(xué)與化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定和表面易修飾等優(yōu)點(diǎn),在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用潛力引起了人們廣泛關(guān)注。
　

2、　本論文首先采用納米鉆石(ND)作為載體,轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)作為靶向配體修飾納米鉆石,制備了靶向載體;其次以阿霉素(DOX)為藥物模型制備了靶向載藥系統(tǒng)。研究了它們與細(xì)胞之間的生物效應(yīng)。主要工作如下:
　　1、選用聚賴氨酸(PL)做橋梁,制備了FND-PL-Tf靶向納米顆粒,以人宮頸癌細(xì)胞(HeLa)為體外模型,利用激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀研究了FND-PL-Tf納米顆粒與細(xì)胞的相互作用,發(fā)現(xiàn)FND-PL-Tf能進(jìn)入活細(xì)胞且位于

3、細(xì)胞質(zhì);細(xì)胞攝取FND-PL-Tf納米顆粒的數(shù)量與顆粒濃度、時(shí)間有關(guān),由網(wǎng)格蛋白決定、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體介導(dǎo)機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞。FND-PL偶聯(lián)不同Tf量的FND-PL-Tf納米顆粒與HeLa細(xì)胞作用,發(fā)現(xiàn)偶聯(lián)最多Tf的FND-PL-Tf納米顆粒,進(jìn)入細(xì)胞的量最少,這可能與空間位阻效應(yīng)密切相關(guān),表明細(xì)胞攝取FND-PL-Tf納米顆粒的數(shù)量與納米顆粒表面偶聯(lián)轉(zhuǎn)鐵蛋白量有關(guān)。該研究顯示FND-PL-Tf納米顆粒具有腫瘤靶向檢測功能。
　　2、由T

4、f、DOX和ND三者連接順序的優(yōu)化,制備了不同的納米藥物,并與HepG2細(xì)胞作用,選定了靶向效果最好的納米藥物ND-Tf-DOX。制備方法如下:首先Tf與DOX通過物理吸附制備出Tf-DOX復(fù)合物,再與ND共價(jià)偶聯(lián)。用激光動(dòng)態(tài)光散射儀測得其Zeta電位值為(-8.95±1.5)mV,粒徑大小為(235±1.8)nm。由紫外可見分光光度法計(jì)算出ND上偶聯(lián)Tf的量為(790±35)μg/mg,吸附DOX的量為(70±7)μg/mg。

5、　　3、以人肝癌細(xì)胞(HepG2)、人宮頸癌細(xì)胞(HeLa)、人胚腎細(xì)胞(HEK293)為體外模型,采用流式細(xì)胞法、激光共聚焦顯微鏡、MTT比色法研究了ND-Tf-DOX體系與細(xì)胞的相互作用。細(xì)胞流式儀測定結(jié)果表明細(xì)胞內(nèi)吞N(yùn)D-Tf-DOX具有時(shí)間、能量、溫度依賴性,是網(wǎng)格蛋白決定、受體介導(dǎo)的過程,而且與細(xì)胞表面受體表達(dá)量有關(guān)。激光共聚焦技術(shù)再次證明ND-Tf-DOX是由受體介導(dǎo)途徑進(jìn)入細(xì)胞且位于溶酶體內(nèi)。MTT比色法表明納米顆粒ND和