轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在非小細胞肺癌中的表達及其機制的研究.pdf

1、目的:肺癌是當今世界最常見的癌癥，其中非小細胞肺癌(NonSmall Cell Lung Cancer，NSCLC)所占比例超過85％。而由于工業(yè)化、城鎮(zhèn)化、人口老齡化等進程的加快以及不良生活方式和環(huán)境污染的持續(xù)存在，肺癌形勢將愈發(fā)嚴峻，也給肺癌的臨床診治帶來了新的挑戰(zhàn)與機遇。臨床工作中我們注意到許多肺癌患者存在異常鐵代謝情況，已有的研究也表明細胞鐵過載是促進惡性腫瘤產(chǎn)生的重要原因之一，而轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(transferrin recep

2、tor，TfR)在細胞鐵過載（特別是鐵攝入和轉(zhuǎn)運）過程扮演重要作用，因此本研究開創(chuàng)性地著眼于肺癌患者的異常鐵代謝情況，從TfR在NSCLC中的表達情況入手，結(jié)合有關(guān)臨床病理資料相對全面系統(tǒng)地分析NSCLC中TfR表達的臨床意義，同時國內(nèi)外首次在細胞層面檢測7種不同的常見NSCLC細胞系(A549、H23、PC9、H1299、H520、H125和H460)的TfR表達情況，并探討TfR在NSCLC細胞增殖生長中可能的作用機制，從而明確Tf

3、R在NSCLC中潛在或現(xiàn)實的基礎(chǔ)或臨床價值。
　　方法:應(yīng)用免疫組織化學法檢測42例NSCLC組織標本和23例正常肺組織標本中TfR蛋白的表達情況，結(jié)合有關(guān)臨床病理資料分析TfR表達情況與NSCLC組織臨床病理學特征之間的關(guān)系。應(yīng)用WesternBlot方法進一步測定7種常見經(jīng)典NSCLC細胞株(A549、H23、PC9、H1299、H520、H125和H460)和正常人支氣管上皮細胞株HBE中TfR蛋白的表達水平，選擇表達水平最

4、高、最穩(wěn)定的某一細胞株以轉(zhuǎn)染siRNA干擾技術(shù)沉默其TfR基因使TfR表達降低，然后應(yīng)用WST-8試驗和平板克隆形成試驗研究TfR表達水平降低對該株細胞增殖生長的影響，并進而推斷TfR對該肺癌細胞株增殖生長影響的作用機制。
　　結(jié)果:免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)肺組織細胞TfR主要表達定位于細胞膜和細胞漿內(nèi)膜性結(jié)構(gòu)，以支氣管粘膜上皮細胞和肺泡巨噬細胞多見。NSCLC組織TfR陽性表達率為88.10％(37/42)，表達積分3.92±2.12，

5、均明顯高于正常肺組織[TfR陽性表達率21.74％(5/23)，表達積分0.73±1.35](P＜0.05);此外，分析發(fā)現(xiàn)NSCLC組織TfR表達水平與患者年齡、性別、吸煙史、腫瘤類型、腫瘤分化程度、腫瘤大小及臨床分期等臨床病理特征均無相關(guān)性(P＞0.05)。Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)上述7種NSCLC細胞TfR表達水平較正常肺HBE細胞均升高，其中以H520細胞株TfR表達水平最高、表達最穩(wěn)定。熒光細胞轉(zhuǎn)染效率約為75.8％，

6、提示H520細胞siRNA轉(zhuǎn)染成功，同時Western Blot檢測證實3個不同的siRNA干擾序列均有效沉默H520細胞TfR基因并明顯降低TfR表達，以TfR-homo-2061序列干擾效果最佳;WST-8試驗和平板克隆形成試驗則表明，TfR表達水平下降對肺癌H520細胞的增殖生長有明顯抑制作用。
　　結(jié)論:1.NSCLC組織TfR表達水平明顯高于正常肺組織，其表達水平與患者年齡、性別、吸煙史、腫瘤病理類型、腫瘤分化程度、腫瘤