牛乳鐵蛋白基因片段在原核細(xì)胞中的表達(dá)及牛乳鐵蛋白肽活性檢測(cè).pdf

1、抗生素耐藥性已經(jīng)成為全球飼料工業(yè)和人醫(yī)藥界廣泛關(guān)注的課題，乳鐵蛋白肽成為一種很有前景的抗生素替代物，它由25個(gè)氨基酸組成的小肽，源自牛乳鐵蛋白氮端（Phe17到Phe41）。由于牛乳鐵蛋白肽具有強(qiáng)大的廣譜抗菌活性，它在異源表達(dá)時(shí)對(duì)宿主（如大腸桿菌細(xì)胞）有很強(qiáng)的毒害作用。本實(shí)驗(yàn)的目的是建立一種有效的大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)，獲得無活性的或者無毒害作用的牛乳鐵蛋白肽前體。我們合成了牛乳鐵蛋白（包含乳鐵蛋白肽片段）的DNA片段，可編碼牛乳鐵蛋白氮

2、端的121個(gè)氨基酸。該DNA片段重組到表達(dá)載體pET-30a(+)上，重組子轉(zhuǎn)入大腸桿菌Rosetta(DE3)細(xì)胞中。IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE電泳顯示，轉(zhuǎn)化子表達(dá)了一條大約19.2kDa的牛乳鐵蛋白片段，表達(dá)量約占宿主蛋白總表達(dá)量的30％，用Ni Sepharose HighPerformance親和層析柱純化重組蛋白，目的蛋白經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)后仍可見清晰的重組表達(dá)產(chǎn)物，與預(yù)期目的蛋白產(chǎn)物大小基本相符。然后用胃蛋白酶消