池蝶蚌鐵蛋白基因的特征與表達分析.pdf

1、池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)原產(chǎn)于日本滋賀縣琵琶湖,屬軟體動物門、瓣鰓綱、蚌科、帆蚌屬,是一種優(yōu)質的淡水育珠蚌。本研究從池蝶蚌中克隆得到兩個鐵蛋白亞基基因(HsFer-1和HsFer-2),熒光定量PCR技術分析了ferritinmRNA組織表達譜及在細菌誘導下主要組織中ferritin表達特征,原核表達重組蛋白,制備多克隆抗體。
　　 1.從本實驗室構建的嗜水氣單胞菌誘導的池蝶蚌血細胞cDNA文庫中獲得編

2、碼ferritin的兩條EST,運用SMARTRACE方法克隆得到HsFer-1和HsFer-2基因的cDNA全長。序列信息已提交至NCBI,GenBank登錄號分別為HQ841015和HQ841016。
　　 2.Real-timePCR結果顯示HsFer-1和HsFer-2mRNA在肝胰腺、性腺、斧足、腸、腎、心臟、鰓、閉殼肌、外套膜和血細胞中均有表達,在肝胰腺中表達量最高,其次為性腺、斧足和腸,在血細胞中表達量最低。

3、>　　 3.用嗜水氣單胞菌誘導池蝶蚌,Real-timePCR結果顯示細菌誘導顯著上調HsFer-1基因mRNA在肝胰腺、性腺和血細胞中的表達,其最高表達水平分別是對照組的2.47倍、9.59倍和1.37倍。誘導后,HsFer-2基因mRNA表達量在性腺中升高到4.87倍,而在肝胰腺和血細胞中分別下降至0.52倍和0.57倍。
　　 4.構建pET-32a-HsFer-1和pET-32a-HsFer-2重組表達質粒,原核表達重