重組人乳鐵蛋白的表達(dá)純化及其功能研究.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，LF)是轉(zhuǎn)鐵蛋白家族中一種具有多種生物功能和活性的糖蛋白，也是近年來在抗癌和抗炎癥領(lǐng)域比較受關(guān)注的一種具有潛在藥物開發(fā)價(jià)值的蛋白。目前，從幾種哺乳動物的乳汁或者初乳中提取出來的天然的LF已經(jīng)用作商業(yè)用途，并且重組乳鐵蛋白(rLF)己從病毒、真菌、細(xì)菌、昆蟲、植物和動物表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)并大量純化。本研究利用家蠶生物反應(yīng)器系統(tǒng)成功的表達(dá)出具有生物活性的重組人乳鐵蛋白(rhLF)，采用免疫親和層析的方法對家蠶血

2、淋巴內(nèi)的rhLF進(jìn)行了純化，質(zhì)譜鑒定結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫里所提交的人乳鐵蛋白的氨基酸序列一致性為100％，rhLF分子量為78 kDa，略低于天然的人乳鐵蛋白，有可能是由于家蠶體內(nèi)存在著相對于人體的不完全的糖基化修飾。
　　 本研究在純化rhLF的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步比較系統(tǒng)的研究了rhLF的生物活性以及功能，選取E.coli FG1菌種進(jìn)行抑菌活性鑒定，同時(shí)，在體外條件下測定了對人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人結(jié)腸腺癌細(xì)胞(LoVo)

3、、人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)和人胚腎細(xì)胞(Hek293)的生長和增殖的影響。MTT實(shí)驗(yàn)得出rhLF對三種腫瘤細(xì)胞的最佳抑制濃度，其中對MCF-7和LoVo抑制率能達(dá)到40％，通過流式細(xì)胞儀測定了rhLF對MCF-7和LoVo的細(xì)胞周期以及凋亡的影響，rhLF通過阻滯G1期進(jìn)而抑制MCF-7細(xì)胞的增殖，但是對LoVo是通過G2期的阻滯作用。兩種細(xì)胞均在36h達(dá)到凋亡的最大值。為進(jìn)一步討論rhLF抑制腫瘤細(xì)胞增值的機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和依據(jù)，