家蠶表達(dá)重組人乳鐵蛋白及其口服治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物研究.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，LF)是主要存在于哺乳動物乳汁中的一種鐵結(jié)合糖蛋白，具有多種生物學(xué)功能，已成為在抗病毒、抗腫瘤和抗炎等領(lǐng)域備受矚目的潛在藥物開發(fā)對象。目前，用于藥物研究的LF主要來源于從哺乳動物乳汁中提取的天然LF和利用基因重組技術(shù)得到的重組LF，都需要經(jīng)過純化、濃縮等加工過程，不僅產(chǎn)量低，而且工藝復(fù)雜、成本高，使藥物的開發(fā)和大規(guī)模生產(chǎn)都受到一定限制。
　　基于家蠶在我國資源豐富，易飼養(yǎng)，家蠶表達(dá)系統(tǒng)具有翻譯后修

2、飾的功能，且蠶蛹安全、可食等優(yōu)勢，并結(jié)合LF具有抗炎和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的特點(diǎn)，本研究利用含人乳鐵蛋白(hLF)基因的重組桿狀病毒感染家蠶蛹，在蠶蛹中表達(dá)重組人乳鐵蛋白(rhLF)，將表達(dá)rhLF的蠶蛹經(jīng)勻漿、凍干成蠶蛹粉后通過口服對小鼠潰瘍性結(jié)腸炎(UC)進(jìn)行治療，不經(jīng)純化，可節(jié)省時間，降低成本，以探究一種新型、廉價的治療UC的方法。首先，將重組病毒vBm-hLF接種蠶蛹，在蠶蛹中成功表達(dá)了分子量80kDa左右的rhLF，且表達(dá)量最高可

3、達(dá)0.38mg/mL蠶蛹勻漿上清液，將蠶蛹凍干后檢測蠶蛹粉中rhLF的相對含量約為1.2mg/g。以E.coliTG1菌種為對象進(jìn)行體外抑菌活性研究，發(fā)現(xiàn)rhLF蠶蛹粉能夠抑制其生長甚至將其殺死，表明rhLF具有良好的抑菌活性。為了初步評價rhLF蠶蛹粉的安全性，以最大給藥量(10g/kg)灌胃小鼠進(jìn)行急性毒性試驗研究，觀察期內(nèi)小鼠未表現(xiàn)出明顯的毒性反應(yīng)，各主要臟器未見明顯異常，說明口服rhLF蠶蛹粉對小鼠的毒性極低。
　　在確定

4、了rhLF蠶蛹粉的生物學(xué)活性和安全性后，考察其對小鼠急性UC的治療作用。通過5％DSS誘導(dǎo)建立小鼠急性UC模型，分別以rhLF蠶蛹粉高、中、低(5、2.5、1.25g/kg)三個劑量給以灌胃，并以柳氮磺胺吡啶(SASP)和正常蠶蛹粉分別作為陽性和陰性對照，發(fā)現(xiàn)rhLF蠶蛹粉能明顯減輕小鼠的炎癥反應(yīng)和結(jié)腸的炎癥損傷，降低DAI分?jǐn)?shù)和MPO、OPN的含量，說明rhLF蠶蛹粉對小鼠急性UC具有一定的治療作用。為了進(jìn)一步探究rhLF蠶蛹粉的作用

5、機(jī)制，ELISA檢測小鼠血清中IL-1α、IL-4、IL-6、IL-10細(xì)胞因子的含量，發(fā)現(xiàn)經(jīng)rhLF蠶蛹粉治療后，血清中促炎細(xì)胞因子IL-1α、IL-6水平顯著下降，抗炎細(xì)胞因子IL-4、IL-10水平顯著上升，推測rhLF蠶蛹粉主要是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)平衡來促進(jìn)結(jié)腸組織的炎癥恢復(fù)，達(dá)到治療UC的目的。
　　本研究在蠶蛹中成功表達(dá)了具有生物學(xué)活性的rhLF，初步探究了rhLF蠶蛹粉對小鼠急性UC模型的治療作用及作用機(jī)制，為今后