短程小劑量甲氨喋呤防治急性移植物抗宿主病的動物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 探討短程小劑量MTX對小鼠異基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的防治作用。 第一部分 MTX不同給藥次數(shù)對小鼠allo-BMT后aGVHD的預(yù)防作用 方法: 雌性BALB/c(H-2d)小鼠為受鼠，雄性C57BL/6(H-2b)小鼠為供鼠，建立aGVHD模型。受鼠隨機(jī)分成6組，每組10只。具體分組如下：A組為單純照射組；B組單純移植組，不用aGVHD預(yù)防藥物；C組單用CSA預(yù)防組(

2、CsA5mg·kg-1·d-1腹腔注射，+1d開始用藥，當(dāng)小鼠胃腸功能恢復(fù)后改為5mg·kg·-1·d-1灌胃)；D組為兩次MTX(10mg/m2腹腔注射，+1d、+3d用藥)聯(lián)合CSA(用法及劑量同C組)預(yù)防組；E組為三次MTX(10mg/m2腹腔注射，+1d、+3d、+6d用藥)聯(lián)合CSA預(yù)防組；F組四次MTX(10mg/m2腹腔注射，+1d、+3d、+6d、+11d用藥)聯(lián)合CSA預(yù)防組。比較各組受鼠aGVHD的發(fā)生情況，生存期、

3、病理變化、造血重建及其嵌合狀態(tài)。 結(jié)果: (1) 各移植組受鼠aGVHD的發(fā)生率：B組單純移植組、C組單用CSA預(yù)防組和D組兩次MTX聯(lián)合CSA組小鼠aGVHD發(fā)生率100％，30天內(nèi)均死于aGVHD。E組三次MTX聯(lián)合CSA預(yù)防組、F組四次MTX聯(lián)合CSA預(yù)防組aGVHD的發(fā)生率低于B、C、D各組(P<0.05)，E組、F組aGVHD的發(fā)生率分別是40％和30％(P>0.05)。 (2) 各移植組受鼠臨床及病理

4、GVHD評分：B組評分明顯高于C、D、E、F各組(P<0.05)，C組高于D、E、F組(P<0.05)，D組高于E、F組(P<0.05)，E組和F組無差異(P>0.05)。 (3) 各移植組受鼠生存情況：E組、F組30天生存率高于B、C、D各組(P<0.05)，E組、F組30天生存率分別為50％和60％(P>0.05)。 (4) 各移植組受鼠白細(xì)胞恢復(fù)時間：B組單純移植組白細(xì)胞恢復(fù)至>1×109/L的時間依次短于C組單用

5、CSA預(yù)防組、D組CSA聯(lián)合兩次MTX組、E組CSA聯(lián)合三次MTX組、F組CSA聯(lián)合四次MTX組(P<0.05)；F組白細(xì)胞恢復(fù)時間最長，與C組、D組、E組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 (5) 各組移植受鼠嵌合狀態(tài)：骨髓移植后30d，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測存活受鼠的異基因嵌合率均達(dá)95％～100％。 第二部分 MTX不同劑量、不同時間點(diǎn)對小鼠allo-BMT后aGVHD的治療作用 方法: 將發(fā)生輕至中度aGVH

6、D受鼠隨機(jī)分為對照組(A組未用MTX治療組)和實(shí)驗(yàn)組(MTX不同劑量組和不同時間點(diǎn)組)。(1) MTX不同劑量組分三組(各組受鼠在發(fā)生aGVHD后即刻給以不同劑量的MTX治療，每周一次，共四周)：B組MTX 10mg/m2；C組MTX 7.5mg/m2；D組MTX 5mg/m2。(2) MTX不同時間點(diǎn)組分三組(各組受鼠在發(fā)生aGVHD后的不同時間點(diǎn)均予以MTX10mg/m2治療，每周一次，共四周)：E組(0h)予以治療；F組(24h)

7、后予以治療：G組(48h)后予以治療。分析各組受鼠aGVHD治療有效率及白細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化。 結(jié)果: (1) MTX不同劑量組：B組MTX 10mg/m2即刻給藥組總的有效率(100％)高于C組7.5mg/m2(50％)、D組5mg/m2(0％)(P<0.05)，C組有效率高于D組(P<0.05)。 (2) MTX不同時間點(diǎn)組：E組(0h)予以MTX治療組總的有效率(100％)高于F組(24h)后治療組(50％)及

8、G組(48h)后治療組(0％)(P<0.05)，F(xiàn)組總有效率又高于G組(P<0.05)。 (3) 治療時各組小鼠外周血白細(xì)胞基本恢復(fù)至>1×109/L，用藥后各組小鼠白細(xì)胞無明顯下降，未發(fā)現(xiàn)MTX的相關(guān)感染。 結(jié)論: (1)三次劑量和四次劑量MTX聯(lián)合CSA方案能有效的預(yù)防小鼠allo-BMT后的aGVHD，與單用CSA預(yù)防組或MTX兩次劑量組相比aGVHD發(fā)生率降低，aGVHD的嚴(yán)重程度減輕，生存期延長(P<0