磷酸化Hsp27與STAT3結(jié)合促進(jìn)自噬抑制肝細(xì)胞脂質(zhì)變性的分子機(jī)制研究.pdf

1、非酒精性脂肪肝病是指以無(wú)過(guò)量飲酒史，以肝細(xì)胞脂質(zhì)變性為特征的臨床綜合征，是常見(jiàn)的慢性肝病，也是導(dǎo)致終末期肝病的危險(xiǎn)因素。目前，尚無(wú)有效防治藥物。自噬是真核細(xì)胞中普遍存在的溶酶體降解程序。研究表明，自噬能夠促進(jìn)脂質(zhì)代謝，緩解肝臟脂質(zhì)變性。熱休克蛋白27(Hsp27)是重要的分子伴侶，能夠發(fā)生磷酸化修飾，而磷酸化導(dǎo)致Hsp27聚合度和功能的改變。研究表明，Hsp27參與自噬調(diào)控。但是，Hsp27，尤其是磷酸化Hsp27參與自噬調(diào)控的具體機(jī)制

2、尚不明確，有待進(jìn)一步研究。
　　在本論文中研究了磷酸化Hsp27在激活自噬以及抑制肝細(xì)胞脂質(zhì)變性中的作用。發(fā)現(xiàn)Hsp27與STAT3（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3）結(jié)合，促進(jìn)自噬及脂質(zhì)代謝。首先，通過(guò)高脂喂養(yǎng)C57/BL6小鼠，建立小鼠肝臟脂質(zhì)變性模型，發(fā)現(xiàn)高脂喂養(yǎng)上調(diào)小鼠肝臟組織中Hsp25（人Hsp27在嚙齒類(lèi)中的同源蛋白）的磷酸化和自噬水平。同樣，在體外培養(yǎng)的人肝臟L02細(xì)胞中，軟脂酸促進(jìn)Hsp27磷酸化和自噬激活。在軟脂酸處理

3、前，利用RNA干擾下調(diào)Hsp27的表達(dá)，或者利用Hsp27磷酸化抑制劑KRIBB3處理，或者過(guò)表達(dá)非磷酸化突變的Hsp27-3A，則抑制軟脂酸激活的自噬，并加劇脂質(zhì)變性。若過(guò)表達(dá)野生型的Hsp27-WT或者持續(xù)磷酸化突變的Hsp27-3D，則提高L02細(xì)胞的自噬水平，并緩解脂質(zhì)變性。利用羥氯喹抑制自噬體的降解，則阻斷磷酸化的Hsp27對(duì)脂質(zhì)變性的緩解作用。在高脂喂養(yǎng)的小鼠模型中，利用KRIBB3抑制Hsp25磷酸化，則抑制自噬激活，并加

4、劇肝臟脂質(zhì)變性。
　　進(jìn)一步研究了Hsp27磷酸化激活自噬的分子機(jī)制。通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Hsp27能與STAT3形成復(fù)合物，更為重要的是，軟脂酸處理后，Hsp27與STAT3形成的復(fù)合物增加，與此同時(shí)，STAT3與PKR的復(fù)合物明顯減少。如果利用RNA干擾下調(diào)Hsp27的表達(dá)，則抑制STAT3從PKR解離。如果利用KRIBB3抑制Hsp27磷酸化，則抑制Hsp27/STAT3復(fù)合體形成，并抑制STAT3從PKR解離。此外，過(guò)

5、表達(dá)野生型的Hsp27-WT和持續(xù)磷酸化突變的Hsp27-3D，則促進(jìn)STAT3從PKR解離。過(guò)表達(dá)非磷酸化突變的Hsp27-3A，則抑制STAT3從PKR的解離。與野生型的Hsp27-WT相比，持續(xù)磷酸化突變的Hsp27-3D與STAT3結(jié)合的能力更強(qiáng)。
　　綜上所述，本論文的研究發(fā)現(xiàn)，磷酸化Hsp27與STAT3結(jié)合，干擾了STAT3與PKR復(fù)合物的形成，削弱STAT3對(duì)PKR的抑制作用，促進(jìn)PKR磷酸化eIF2α，激活自噬，