HSP-27磷酸化在人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：研究熱休克蛋白-27(HSP-27)磷酸化在高糖誘導(dǎo)的的人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡中的作用；在此基礎(chǔ)上，進一步研究HSP-27磷酸化與高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡相關(guān)的信號轉(zhuǎn)道通路及其可能的機制。
　　方法:取健康剖腹產(chǎn)孕婦的臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)進行培養(yǎng)，選擇2~3代細胞進行實驗。用特異性Phosp ho-HSP27抗體的蛋白免疫印跡法檢測HSP-27的活性。采用Annexin-Ⅴ-PI染色流式細胞技術(shù)檢測人臍靜脈內(nèi)皮

2、細胞凋亡。
　　結(jié)果：高糖呈時間依賴性誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞中HSP-27磷酸化，30.5mmol/L高糖作用細胞24、48、72h， HSP-27磷酸化水平較正常對照組分別提高了100％（P<0．05），182.5%（P<0.01），117%（P<0．05）。而HSP-27選擇性阻斷劑槲皮素（10umol／L）作用48h可以抑制高糖誘導(dǎo)的HSP-27磷酸化，與高糖組相比槲皮素組HSP-27磷酸化水平降低了52.6%（P<0.01）

3、，與此同時，可使凋亡增加，內(nèi)皮細胞凋亡率較高糖組增高了37.6%（P<0.01）。高糖誘導(dǎo)的HSP-27磷酸化可以被磷脂酰肌醇-3(phosphoinostide-3 kinase,PI3K)選擇性抑制劑 LY294002和細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(e xtrac e llular s igna l re gulated kinase1/2,ERK1/2)選擇性抑制劑U0126分別成濃度依耐性抑制，與高糖組相比最大抑制率分別為62.6%