磷酸化熱休克蛋白27與腫瘤細胞TRAIL耐受的分子機制的研究.pdf

1、HSP27是小熱休克蛋白家族的一個重要成員，其生理功能主要包括保護細胞免受各種應(yīng)激因素如自由基、高溫、缺血和毒性物質(zhì)的損傷，促進蛋白質(zhì)的正確折疊、組裝，參與細胞的增值、分化及細胞凋亡的信號調(diào)節(jié)等。以往對HSP27的研究側(cè)重于HSP27蛋白本身對細胞凋亡信號通路的調(diào)控，而其磷酸化狀態(tài)在細胞凋亡過程中的細胞保護作用研究較少。本課題對磷酸化HSP27在腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)誘發(fā)的促存活信號通路中的作用進行了研究。
　

2、　TRAIL是腫瘤壞死細胞因子家族成員之一，因為它能夠選擇性誘導(dǎo)多種腫瘤細胞凋亡，而對動物模型中大部分正常細胞沒有損傷，在癌癥治療方面有著非常廣闊的應(yīng)用前景。但是TRAIL應(yīng)用臨床時發(fā)現(xiàn)相當(dāng)數(shù)量的腫瘤患者對TRAIL具有抵抗性，因此TRAIL耐受機制的闡明是進一步將TRAIL用于臨床治療的關(guān)鍵。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)了磷酸化形式的HSP27在TRAIL激活的信號通路中的重要地位。1)運用特異性抑制劑KRIBB3或利用RNA干擾手段下調(diào)細胞

3、中MAPKAPK2(MK2)的蛋白水平，抑制上游激酶活性間接抑制HSP27的磷酸化，或者過表達HSP27-3A和HSP27-3D磷酸化突變體直接調(diào)控HSP27的活性，證明抑制HSP27磷酸化增強了TRAIL誘導(dǎo)的細胞凋亡(細胞凋亡特征性形態(tài)改變，multicaspase活性增強，細胞凋亡率增加，凋亡蛋白切割增多)。2)HSP27通過調(diào)控共同上游激酶Src的活性調(diào)控Akt和ERK的激活，影響細胞內(nèi)促存活信號通路的傳遞。通過轉(zhuǎn)染HSP27-

4、15A和HSP27-78/82A非磷酸化位點突變體證明HSP27的絲氨酸78/82位點發(fā)揮著關(guān)鍵作用。3)TRAIL刺激一方面通過促進磷酸化的HSP27和Src在細胞內(nèi)以間接結(jié)合的方式形成復(fù)合體并引導(dǎo)Src定位于細胞膜內(nèi)側(cè)，另一方面磷酸化的HSP27通過一種未知的機制促進TRAIL死亡受體的內(nèi)吞，從而增加TRAIL受體和Src之間的相互作用，使TRAIL信號更易于向促存活信號通路傳遞。
　　綜上所述，本研究首次揭示了磷酸化HSP2