熱休克蛋白27及其磷酸化對p53的調(diào)控及介導(dǎo)MCF-7細(xì)胞多柔比星耐受的研究.pdf

1、p53作為一個重要的抑癌基因，一方面調(diào)控著促進(jìn)細(xì)胞凋亡的過程，另一方面通過調(diào)控細(xì)胞周期從而調(diào)節(jié)應(yīng)激條件下細(xì)胞修復(fù)機制。在很多腫瘤細(xì)胞中都伴隨著熱休克蛋白27(Hsp27)的高表達(dá)，它是熱休克蛋白家族中可以被磷酸化修飾的小熱休克蛋白的典型代表。Hsp27調(diào)節(jié)p53蛋白水平和其激活已有報道，但對于涉及Hsp27磷酸化修飾在此過程中作用的研究并不系統(tǒng)和完整。本課題就Hsp27及其磷酸化形式對于p53蛋白的調(diào)控，下游信號的激活和相關(guān)信號通路等都

2、做了較為深入和系統(tǒng)的研究。
　　首先，本研究發(fā)現(xiàn)Hsp27參與了調(diào)節(jié)p53蛋白穩(wěn)定性和激活的過程。在人胚腎細(xì)胞株HEK293A細(xì)胞中的研究發(fā)現(xiàn)，Hsp27能下調(diào)外源性p53引起的p21轉(zhuǎn)錄激活，并且抑制了由此引起的細(xì)胞周期阻滯。在細(xì)胞內(nèi)通過瞬時轉(zhuǎn)染過表達(dá)外源性Hsp27發(fā)現(xiàn)Hsp27可以顯著增強p53的泛素化，但是卻對p53下游的MDM2的表達(dá)呈現(xiàn)劑量效應(yīng)的抑制作用。通過對于p53下游p21，MDM2的抑制和對p53本身泛素化的促

3、進(jìn)，表明Hsp27對p53具有負(fù)向調(diào)控的功能，從而緩解由于p53引起的細(xì)胞周期阻滯。
　　Hsp27是一種可以被磷酸化修飾的小熱休克蛋白，其磷酸化和非磷酸化形式均在細(xì)胞的增殖、凋亡、分化、炎癥等多種生理病理過程中發(fā)揮了不同的生物學(xué)功能。在本文中，我們發(fā)現(xiàn)并報道了磷酸化的Hsp27發(fā)揮著與非磷酸化的Hsp27不同的作用:1)過表達(dá)磷酸化Hsp27突變體(Hsp27-3D)促進(jìn)了p53的激活，但是長時間作用后促進(jìn)了p53的下調(diào);2）過

4、表達(dá)Hsp27-3D促進(jìn)了p53的核聚集，而過表達(dá)非磷酸化Hsp27突變體(Hsp27-3A)并沒有表現(xiàn)出這種p53趨核聚集的現(xiàn)象，相反的出現(xiàn)了出核增加的趨勢;3）磷酸化的Hsp27促進(jìn)了ATM的激活，從而增強了p53/p21信號級聯(lián)反應(yīng)。這些結(jié)果都表明Hsp27磷酸化后對于p53的激活發(fā)揮了重要的作用。
　　多柔比星(Dox)是一種常用的DNA毒抗癌藥物，容易在細(xì)胞核內(nèi)聚集并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。在最后一部分中，我們發(fā)現(xiàn)亞致死劑量的Do

5、x可以引起具有野生型p53的乳腺癌細(xì)胞MCF-7中Hsp27，ATM和p53的磷酸化，磷酸化后的Hsp27增加了與ATM，p53形成三元復(fù)合物的水平，從而引起p21的積累。而當(dāng)使用多種手段抑制Hsp27磷酸化后，ATM和p53磷酸化也同時被抑制，進(jìn)而阻斷了p21蛋白水平的上調(diào)和其介導(dǎo)的細(xì)胞保護(hù)作用，引起細(xì)胞凋亡的增加。這些結(jié)果表明磷酸化的Hsp27通過增加與ATM的結(jié)合從而激活p53，通過p53/p21通路對細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)性調(diào)節(jié)。