Pokemon對MCF-7細胞增殖的影響及Pokemon基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制的研究.pdf

1、紅髓生成因子(POKerythroidmyeloidontogenicfactor，Pokemon)是一種新近發(fā)現(xiàn)的在多種腫瘤中高表達的原癌基因，可以抑制抑癌基因ARF的表達。 本課題的目的在于研究Pokemon對MCF-7乳腺癌細胞增殖的影響，探究Pokemon基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的機制。構(gòu)建Pokemon表達質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染到MCF-7細胞中，通過MTT、平板克隆形成能力實驗觀察到Pokemon可以促進MCF-7細胞的增殖。構(gòu)建一系列

2、不同長度的Pokemon啟動子熒光素酶報告基因載體，分別轉(zhuǎn)染這幾種報告基因載體到HepG-2和293T細胞中，通過雙熒光素酶報告基因檢測法確定了Pokemon基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游1000bp為Pokemon啟動子的核心調(diào)控區(qū)域。利用TFSEARCH程序發(fā)現(xiàn)Pokemon啟動子的核心調(diào)控區(qū)域上存在兩個GC-box的順式作用因子，通過雙熒光素酶報告基因檢測法、突變分析證明這兩個GC-box對Pokemon啟動子活性起重要的作用。而Sp1是G