小干擾RNA抑制c-myc表達對MCF-7細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、．蠶．鑭戈誓碩士學位論文( 2 0 0 6 屆)小干擾R N A 抑制c - m y c 表達對M C F - 7 細胞增殖和凋亡的影響K n o c k d o w n o f c - m y c e x p r e s s i o nb ys i R N A i n h i b i t sM C F - 7b r e a s tc a n c e rc e l l sF o Ⅲh a n di n d u c e st h ec e

2、 i l sa p o p t o s i s研究生姓名 盞喝韭指導教師姓名 圍墼虧業(yè)名稱 艘煎生研配方向照擅垃垂璺鹽塹壘基固造疽論z 提曼日期 2 Q 強生{ 且小干擾R N A 抑制c - m y c 表達對M C F - 7 細胞增殖和凋亡的影響 英文摘要K n o c k d o w n o f c - - m y c e x p r e s s i o nb ys i R N A i n h i b i t sM C F -

3、- 7b r e a s t c a n c e rc e l l sg r o w t ha n d i n d u c e s t h ec e l l sa p o p t o s i so b j e c t i v e ：T oe v a l u a t et h e e 自F e c t o fs m a l li n t e r f e r r i n g R N A ( s i R N A ) t a r g e t i

4、 n gc —m y eg e n eO l lt h ep r o l i f e r a t i o na n d a p o p t o s i so f M C F - 7 c e l l sa n d o n t h ee x p r e s s i o n o fc - m y c t a r g e tg e n e ．M e t h o d s ：S i R N At a r g e t i n g c - m y cg

5、 e n e W a St r a n s f e c t e d i n t o M C F - 7 c e l l s b yL i p o f e c t i m i n e X M 2 0 0 0 ．n l ec - m y cm R N A e x p r e s s i o nl e v e lW a Sd e t e c t e db yR e a l - t i m eq u u n t i t i v e P C R

6、, a n dt h e c - m y c p r o t e i n e x p r e s s i o n l e v e l W a S t e s t e d b y W e s t e r nB l o t t i n g ．M T Ta S s a y w a su s e dt o a s s e s st h ep r o l i f e r a t i o no ft h ec e l l s ．F l u o r

7、e s c e n c e —a c t i v a t e d c e l ls o r t e ra n a l y s i sW a S u s e d t od e t e r m i n e a p o p t o s i so f t h e c e l l s ．C - m y ca n d i t st a r g e tg e n e e x p r e s s i o n l e v e l sw e r e a S

8、 s e s s e db y M u l t i p l e x P C R ．R e s u l t s ：( 1 ) M C F - 7 c e l l sw e r et r a n s f e c t e d w i t h c ·m y cs i R N A a b o u t 9 8 ．1 士0 ．0 0 3 ％a t6 h o u r s a f t e r t r a n s f e c t i o n ．(

9、 2 ) T h ee x p r e s s i o nl e v e l so f c - m y cm R N A i nM C F - 7 c e l l sw e r e s u p p r e s s e d b yu p t o 5 0 士O ．0 2 8 ％a n d 8 5 士0 ．0 4 2 ％a t 2 4 a n d4 8 h o u r s a f t e rt r a n s f e c t i o nr e

10、 s p e c t i v e l y ．( 3 ) T h ec o r r e s p o n d i n gd e c r e a S eo f c - m y cp r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l i nM C F - 7 c e l l sW a Sf o u n d ．T h e s u p p r e s s i v e r a t e sw e r e5 2 ％a n d

11、 9 3 ％a t 2 4 a n d 4 8h o u r s a f t e rt r a n s f e c t i o n r e s p e c t i v e l y ．( 4 ) T h eg r o w t hr a t e o fM C F 一7 c e l l sb e g a nt od e c l i n ea f t e rt r a n s f e c f i n gw i t l lc - m y cs i

12、 R N A 2 4h o u r sl a t e r ．T h eg r o w t h r a t eo f M C F - 7c e l l s W a S s u p p r e s s e d m a r k e d l y a t 2 4 a n d 4 8 h o u r s a f t e r t r a n s f e c t i o n ．a(chǎn) n d t h es u p p r e s s i o n r a t

13、 e sw e r e 2 3 ．6 ％a n d3 5 ．6 ％r e s p e c t i v e l y ．( 5 ) T h e a p o p t o s i s r a t e so f M C F - 7c e l l s w e r e2 8 ．8 5 ±0 ．6 5 ％，5 1 ．2 ±0 ．5 2 ％a n d8 0 ．8 ±1 ．3 2 ％a t 2 4 ，4 8 ，7 2 h o

14、u r s a f t e rt r a n s f e c t i o nr e s p e c t i v e l y , a n dw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h o s ei n t h eb l a n kc o n t r o lQ < O ．0 5 ，< 0 ．0 5 a n d < O ．0 5 r e s p e c t i

15、v e l y ) ．( 6 ) T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f c ·m y c t a r g e tg e n e ( s u c h a S D H F R ，h T E R T ，O D C ，c d c 2 5 a ，c a d ，H M G —I ／Y ，C ／E B P a ，p 5 3 ，c y c l i n D l a n dc y c l i n D

16、2 ) i nM C F 一7 c e i l s w e r e a l s o d e c r e a S e dw h e nt h ec - m y ce x p r e s s i o n w a ss u p p r e s s e d b y s i R N A ．C o n c l u s i o n s ：( 1 ) L i p o f e c t a m i n e X M 2 0 0 0t r a n s f e