RNAi介導(dǎo)抑制MCF-7細胞中VEGF基因表達.pdf

1、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是促血管生長的最關(guān)鍵因子之一,而血管的生成在腫瘤的生長過程中起著至關(guān)重要的作用。RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)是一種高效地、特異性地抑制目的基因表達的技術(shù),因此利用RNAi技術(shù)抑制VEGF基因表達,可以抑制血管的生成,抑制腫瘤細胞的增殖。
　　 本實驗將構(gòu)建的三種靶向‘VEGF的質(zhì)粒及四種化學(xué)合成的si

2、RNA,利用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法將其體外轉(zhuǎn)染到人的乳腺癌MCF-7細胞中,應(yīng)用細胞生物學(xué)的方法檢測其抑制VEGF基因表達及抑制腫瘤細胞增殖的作用,以期為RNA干擾在腫瘤治療方面的研究提供有效的實驗依據(jù)。
　　 本論文主要通過以下幾個方面對靶向VEGF的質(zhì)粒及siRNA進行研究:
　　 (1)首先通過GFP標記的VEGF高表達質(zhì)粒(pVEGF-GFP)轉(zhuǎn)染MCF-7細胞,以轉(zhuǎn)染時間、轉(zhuǎn)染試劑濃度比及細胞接種密度為條件進行

3、轉(zhuǎn)染最佳條件的篩選實驗;
　　 (2)將靶向VEGF的三個pSilencer質(zhì)粒分別與GFP標記的VEGF高表達質(zhì)粒依照最佳轉(zhuǎn)染條件進行共轉(zhuǎn)染,利用倒置熒光顯微鏡觀察pSilencer質(zhì)粒對’VEGF基因表達的抑制情況,利用MTT法檢測pSilencer質(zhì)粒對MCF-7細胞增殖的抑制情況;
　　 (3)將化學(xué)合成的四種siRNA轉(zhuǎn)染MCF-7細胞,分別利用MTT、ELISA、RT-PCR檢測siRNA對細胞增殖的抑制、V