2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、目的：明確肝癌細(xì)胞中Pokemon對(duì)CyclinA的調(diào)控作用，為二者的后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：構(gòu)建兩段不同長(zhǎng)度的CyclinA熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒載體：pLuc-300、pLuc-600，均分別與 Pokemon表達(dá)質(zhì)粒和pcDNA3.1(-)轉(zhuǎn)染入體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞HepG2中，培養(yǎng)48小時(shí)后采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)法檢測(cè)CyclinA啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性；將Pokemon siRNA和Scramber siRNA分別轉(zhuǎn)染入

2、肝癌細(xì)胞 HepG2中，培養(yǎng)0、24、48、72小時(shí)后提取細(xì)胞總蛋白，采用Western Blot法檢測(cè)Pokemon和CyclinA的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)法顯示構(gòu)建的pLuc-300、pLuc-600均有轉(zhuǎn)錄活性，其中pLuc-300轉(zhuǎn)錄活性較pLuc-600強(qiáng)，Pokemon對(duì)二者的轉(zhuǎn)錄活性均有抑制。Western Blot法發(fā)現(xiàn)隨著轉(zhuǎn)染Pokemon siRNA時(shí)間的增加，Pokemon蛋白表達(dá)逐漸減

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