阿霉素對人肝癌細胞株HepG2中ABCB1表達的影響.pdf

1、目的:肝癌在國內(nèi)屬于常見惡性腫瘤之一，目前肝癌的諸多治療方法中首選的治療方法是手術(shù)切除，但因為疾病本身特點所致肝切除術(shù)后效果欠佳，復發(fā)率亦較高。同時，由于肝癌發(fā)病較為隱蔽，不易被發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)肝癌患者被發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)到了中期甚至晚期，錯過了適合手術(shù)切除的最佳時間。因此，在治療肝癌而進行的肝切除術(shù)后，化療也是必不可少的治療手段?；熢陬A防肝癌復發(fā)、轉(zhuǎn)移，以及延長病人的生存時間、改善和提高生命質(zhì)量方面具有重要的意義。但是，化療效果往往很難達到理想

2、狀態(tài)，這與肝癌細胞的強耐藥性相關(guān)。在對腫瘤患者死亡原因的研究結(jié)果進行分析時，大量臨床資料統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，其中90％以上的病例死亡與其化療時出現(xiàn)耐藥性密切相關(guān)。因此，深入研究肝癌細胞耐藥發(fā)生的分子機制以及涉及到的通路，可以明確肝癌細胞耐藥機制，并為尋找肝細胞癌新的、有效的治療靶點提供理論依據(jù)。
　　目前針對肝細胞癌的化療藥物多種多樣，如阿霉素，紫杉醇，5-Fu和順鉑等。這些都是肝癌化療的一線藥物，與此同時，也造成了多藥耐藥(MDR)的

3、發(fā)生。多藥耐藥基因ABCB1位于人類7號染色體長臂2區(qū)1帶，屬于ABC(ATP-binding cassette)轉(zhuǎn)運蛋白家族成員，其過度表達成為了腫瘤細胞對化療藥物發(fā)生耐藥的主要原因，但肝癌細胞對阿霉素耐藥性的出現(xiàn)是否與ABCB1過表達有關(guān)，至今未見報道。因此，詳細研究ABCB1在肝癌細胞對阿霉素耐藥過程中的作用具有重要的臨床意義。
　　阿霉素(Doxorubicin)是一種抗腫瘤抗生素，對RNA和DNA的合成有顯著的抑制作用。

4、其藥理作用中，抑制作用最強的方面體現(xiàn)在對RNA的抑制作用方面。其優(yōu)點是抗瘤譜較廣泛，并且多種腫瘤的抑制作用都比較顯著。阿霉素屬于周期非特異性藥物，對各種生長階段的腫瘤細胞都有殺滅作用。阿霉素是當前公認的肝癌切除術(shù)后重要的輔助治療手段，且其臨床療效已經(jīng)得到多方面的確認。
　　為此，本研究探討阿霉素對人肝癌細胞株HepG2及其耐藥細胞株中ABCB1表達的影響，從而進一步闡明ABCB1表達水平改變與肝癌細胞產(chǎn)生化療耐藥性的關(guān)系，為探索新

5、的肝癌治療方法、克服腫瘤耐藥性提供理論依據(jù)。
　　方法:本試驗采用常規(guī)細胞培養(yǎng)方法來培養(yǎng)普通肝癌細胞HepG2，建立其對阿霉素的耐藥細胞株(HepG2/Doxorubicin)，并觀察耐藥細胞株與親本細胞形態(tài)學差異;采用MTT實驗方法，觀察阿霉素對人肝癌細胞HepG2、以及其耐藥細胞株增殖周期的抑制作用;實驗方法方面則采用RT-PCR和Western Blot相結(jié)合的實驗方法，從mRNA水平和蛋白表達水平進行研究，以期觀察人肝癌細

6、胞HepG2、以及耐藥細胞株HepG2/Doxorubicin中ABCB1變化情況。將實驗測得的不同濃度阿霉素對耐藥細胞株HepG2/Doxorubicin抑制率變化與ABCB1 mRNA變化進行相關(guān)分析，為推斷ABCB1與HepG2細胞耐藥性的關(guān)系提供依據(jù)。
　　結(jié)果:1.親本細胞呈梭形，排列比較密集，大小也比較均勻，貼壁生長，細胞間邊界清晰;耐藥細胞株則表現(xiàn)為生長緩慢，形狀變得不規(guī)則，體積略有增大，核皺縮，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡，堆疊

7、生長。
　　2.RT-PCR和Western Blot法檢測ABCB1在HepG2親本細胞和耐藥株中mRNA和蛋白表達水平，結(jié)果顯示耐藥株均明顯高于其親本細胞。
　　3.MTT法檢測親本細胞及其耐藥細胞株的耐藥性，耐藥細胞株在實驗中不同濃度的阿霉素作用下，與親本細胞株相比，其生長抑制率(Inhibition ratio)可觀察到明顯降低，呈現(xiàn)出一定程度上的耐藥性。
　　4.不同濃度阿霉素對耐藥細胞株HepG2/Doxo

8、rubicin抑制率與ABCB1mRNA水平呈負相關(guān)關(guān)系，即隨著ABCB1mRNA水平升高，阿霉素對HepG2/Doxorubicin的抑制作用下降，耐藥性增強。
　　結(jié)論:阿霉素可抑制人肝癌細胞株HepG2的生長增殖。人肝癌細胞株HepG2對阿霉素產(chǎn)生耐藥后，細胞株中ABCB1表達水平明顯增高。隨著ABCB1 mRNA水平升高，耐藥性增強。為今后臨床化學藥物治療肝癌患者時考慮采用聯(lián)合療法提供一定的理論依據(jù)，為完善肝癌多藥耐藥機制