sFRP2對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2生物學(xué)行為的影響.pdf

1、腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素作用、多基因參與的復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程。腫瘤細(xì)胞最明顯的特征就是增殖失控，而在腫瘤細(xì)胞內(nèi)與生長(zhǎng)分化有關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)障礙則是導(dǎo)致增殖失控的重要因素。Wnt/β-catenin信號(hào)途徑是與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的重要信號(hào)途徑之一。該途徑中的Wnt信號(hào)通過(guò)dishevelled(DVL)轉(zhuǎn)導(dǎo)至胞漿并抑制由β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、結(jié)腸癌抑制因子(adenomatous polyposis coli，APC)、糖原激

2、酶合成酶-3β(glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)和 Axin 組成的降解復(fù)合體對(duì)β-catenin的磷酸化，使胞漿內(nèi)游離β-catenin水平增高并進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與T細(xì)胞因子4(T cell factor 4，TCF4)結(jié)合，致β-catenin/ TCF4的活性增高；而β-caten/TCF4的活性增高是大多數(shù)(60％-80％)腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要事件。 分泌型卷曲相關(guān)蛋白(Secrete

3、d frizzled-related protein，sFRP)為一群可以調(diào)控Wnt-frizzled信號(hào)傳導(dǎo)路徑的蛋白質(zhì)。sFRP含豐富的半胱氨酸區(qū)域和親水羧基末端，但沒(méi)有跨膜區(qū)，不能將其信號(hào)傳入細(xì)胞內(nèi)，可競(jìng)爭(zhēng)性地與Wnt分子結(jié)合，從而干擾Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑。 肝癌是我國(guó)常見(jiàn)惡性瘤之一，死亡率高。本試驗(yàn)選擇肝癌細(xì)胞株HepG2為細(xì)胞模型，以攜帶sFRP2目的基因的腺病毒感染HepG2細(xì)胞，利用多種方法從不同角度檢測(cè)sFRP2對(duì)

4、HepG2細(xì)胞增殖、侵襲和遷移等生物學(xué)行為的影響，旨在了解sFRP2抗腫瘤的可能性及其作用機(jī)理。本課題采甩MTT法測(cè)定sFRP2對(duì)HepG2細(xì)胞增值的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)感染前后處于各細(xì)胞周期的比率；免疫組織化學(xué)法觀測(cè)感染前后CD44、E-cadherin、CD82和EMMPRIN的表達(dá)情況，判斷sFRP2對(duì)細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響；Western Blotting確定感染前后的β-catenin表達(dá)水平；Transwell侵襲小室測(cè)定

5、細(xì)胞感染前后的轉(zhuǎn)移遷移能力。 全文主要結(jié)果及結(jié)論如下： Western Blotting證明感染前后的HepG2細(xì)胞均有β-catenin的表達(dá)。MTT法說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組較正常組和對(duì)照組細(xì)胞增殖速度明顯降低，均有顯著性差異(P>0.01)。FCM檢測(cè)結(jié)果證明感染后處于G<,0>/G1期細(xì)胞比例顯著增加，說(shuō)明增殖速度明顯降低。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示sFRP2作用于HepG2細(xì)胞后，使腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子CD44、E-cadheri