原花青素B2對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2生物學(xué)行為和PI-3K-PTEN-Akt-mTOR通路的影響.pdf

1、 原花青素 B2 對(duì)肝癌細(xì)胞 HepG2 生物學(xué)行為和 PI-3K/PTEN/Akt/mTOR 通路的影響 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 (學(xué)術(shù)學(xué)位) 學(xué)生姓名：孔祥軍 指導(dǎo)教師：呂鳳林 教 授 專 業(yè)：生物學(xué) 學(xué)科門類：理學(xué) 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 二 O 一三年四月 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要 I 摘 要 肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）每年會(huì)造成超過(guò) 60 萬(wàn)人的死亡，是全球癌癥引發(fā)死亡的第

2、三大原因。早期肝癌是可以通過(guò)肝切除和肝移植手術(shù)等治療手段治愈的，但這只能用于少數(shù)符合要求的患者。不能采用手術(shù)治療的患者必須得忍受長(zhǎng)期化學(xué)治療帶來(lái)的毒副作用，且復(fù)發(fā)率高。食物中的天然多酚物質(zhì)因其對(duì)癌癥有較好的預(yù)防和治療效果，且毒副作用小，成為癌癥防治藥物的研究熱點(diǎn)。原花青素是一類廣泛存在于日常飲食中的天然多酚類化合物，具有高效的抗氧化和防癌作用。但是不同來(lái)源的原花青素提取物對(duì)腫瘤的作用效果有很大差異，機(jī)制也不同，而且不同成分對(duì)腫瘤的作用效

3、果尚不清楚。各類原花青素中分布最廣的是二聚體，葡萄籽原花青素 B2（Grape seed procyanidin B2,GSPB2）是葡萄籽提取物的主要成分，在此我們研究不同濃度 GSPB2（純度>98%）對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2 細(xì)胞行為學(xué)的作用， 并檢測(cè)細(xì)胞 PI-3K/PTEN/Akt/mTOR 信號(hào)通路關(guān)鍵分子活性的變化，為原花青素臨床試驗(yàn)研究提供數(shù)據(jù)及理論支持。 首先分別用 MTT 法、PI 染色、Annexin V-FIT

4、C/PI 染色、Transwell 體外遷移模型以及 Matrigel 體外三維培養(yǎng)模型檢測(cè)不同濃度的 GSPB2 對(duì) HepG2 細(xì)胞的生存率、細(xì)胞周期分布、細(xì)胞凋亡作用、細(xì)胞遷移能力以及管樣形成能力的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨著濃度的升高 GSPB2 對(duì) HepG2 細(xì)胞的生存率抑制效果越明顯(P0.05)。 在不同濃度GSPB2的作用下，HepG2 細(xì)胞 G0/G1 期所占比例變化不明顯(P>0.05)，并且 GSPB2 作用24

5、h， 對(duì) HepG2 細(xì)胞無(wú)明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用(P>0.05)。 隨著 GSPB2 作用濃度的增加，HepG2 細(xì)胞的遷移能力和管樣形成能力會(huì)先受到明顯抑制繼而這種抑制作用趨于不明顯， 低濃度的 GSPB2 對(duì) HepG2 細(xì)胞的遷移能力和管樣形成能力抑制更為明顯。 其次，已知 PI-3K/PTEN/Akt/mTOR 信號(hào)通路是腫瘤生長(zhǎng)、發(fā)展和惡化的重要信 號(hào) 通 路 。 我 們 用 western blotting 檢 測(cè) 到

6、 了 GSPB2 對(duì) HepG2 細(xì) 胞PI-3K/PTEN/Akt/mTOR 信號(hào)通路中關(guān)鍵分子的表達(dá)及活性影響，結(jié)果顯示，不同濃度的 GSPB2 對(duì)此信號(hào)通路中 PI-3K （p110α） 和 p-Akt 的表達(dá)以及 PTEN 和 mTOR的磷酸化水平作用不同。 具體結(jié)果是： 低濃度的GSPB2 可以有效抑制 PI-3K （p110α）和 p-Akt 的 表 達(dá)、 降 低 PTEN 和 mTOR 的 磷 酸 化 水 平(P>0